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福安市水苏糖 C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶(GAP)基 因,其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 G…

福安市水苏糖
C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶(GAP)基 因,其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 GAP基㈥克隆至6.5kh £co/U片段。起始密码子上游的Ikb片段(-976? -1,推断+丨为翻译起始位点)作为启动子,用引物在V端加上N?d位点, 在3'端加上Xbal和BamHI位点。终止密码子下游0.7kb片段(+ 1006? + 1728)作为终止子,用引物在V端加上BamHI位点,在V端加上Pst丨位点, 将两片段在pBluescript SK的No丨丨和Pst丨位点间连接,构建得质粒pGAPPTIO (图5 - 15)。含单链莫奈林的0RF的0. 3kb的Dral - Bgl D片段插至pGAPPTIO 的平头Xbal位点和BamHI位点之间构建得PGAPM3。含rDNA片段的表达质 粒如下构建:从pCLRE2 (图5-14)中分离得到的含部分rDNA的1.2kb Apal 片段插至pBluescript SK的Apal位点构建得质粒pCRAl。在pCRAl的Xhol切 割平头端连接上Sphl连接体构建得pCRA2,在pCRAl的Asp7丨8切割平头端 连接上Notl连接体构建得pCRA3。pCRA3的1.2kh rDNA切割为0.5kb和 0. 7kh Notl - Bgl n片段后连接到质粒pUCBgl的Bgl n位点,构建得质粒 pCRA10o其中质粒pUCBgl由pUC19经EcoRI和HindHI酶切,并在Klenow酶 切处理后在切点处连接Bgl D连接体构建得到。质粒pCRA2经Sphl和EcoRI 酶切后,与由PCLRE16分离得到的含CYH抗性基因的1. Ikl, Sphl - KcoRI片 段连接构述得pCLR216。质粒pCRAlO经Xhol和Ps丨I酶切后,与含CYH抗性 基因的丨.1比?311-5&丨1片段(-184?+974)连接,构建得到pCRALll。从 PGAPM3分离得到的含莫奈林表达盒的2. Okb Notl - PstI片段插至pCLR216的 Notl和PstI位点构逑的质粒PCLRM216 (图5 - 16),插至pCRALl 1的Not丨和 PstI位点间构建得到质粒pKMll (图5-16)。C. W/is的URA3基因经与 的ura3突变子减基互补克隆得到,用作整合目标。URA3的801bP ORF 的 区域(+4?+356)和 3'区域(+356 ~+685)分別为 SaH-Bgin 和Bgl丨丨-AsP718片段,这两个片段插至pUC19的Sail和AsP718构建得质粒 pURAl0在pURAl的Hindffl酶切端和Asp718酶切平头端加上Not丨连接体分 别构建得到pURA2和PURA3。从pURA2的5,端分离得Noll - Bgl H片段,从 PURA3的1端分离得BglD - Notl片段,两片段连接至质粒pUCBg丨的Bgin位 点构建pURAlO。含CYH抗性基因的1. lkb PstI - Sail片段插至pURAlO的Sail 和PstI位点间,构建得pURALl 1。含莫奈林表达盒得2. Okb的Notl - PstI片段 插至pURALll的1^11和?8|丨位点间构建质粒pUMll (图5-16)。
要增加蔗糖的甜度就必须提高分子的亲油性,特别是在轴向4-C及r-c 位上,而2-C和3'-C滞保持羟基游离的状态,因为它们是甜味三角形理论中 的AH和B单元。如按单基团取代比较,蔗糖分子中各羟基的相对活性可大体排 列为:6,>6>4>r>2>3, 3\ 4'但这仅是个原则,羟基被活化而形成活化 级络合过程中还会受到空间阻碍作用,有些羟基在与较大基团作用时会因空间排 列阻碍而受抑制,从而失去应有的活性。例如,4位仲羟基虽比1,伯羟基活泼, 但在酯化反应中各羟基反应的活泼次序是.6-OH,6,-OH>r-OH>2-OHt 且在与像三苯基氣甲烷这样大的取代基团反应时,却是r位的伯羟基优先活化。 通过对氣代产物分离和鉴定,可知蔗糖分子立体选择性反应的反应活性顺序是: 6, - OH >6 - OH >4 - OH > 1, - OH >4, - OH。1, - OH 的氣化速度之所以缓慢, 是因为它是受阻的新戊基型的初级羟基,且毗连于a-异头物基团上。
(一)以环己胺和环己基氨基磺酸或其盐为原料
阁4-3等甜度甜菊背、蔗糖及廿草甜素水溶液的甜味分布曲线 1—荊糖2_甜菊苷3—甘草甜素
甜叶悬钩子苷(Kiihusoside)是用热甲醇从我国南方一带的蘅薇科(Rosaceae) 植物Rubus suatissimus S. Lee抽提出来的一种贝壳杉稀双蔽苦,图4 - 36所示为其化 学结构。Rubusoside在该植物叶子中的含萤较高(>5%),但在植物果实中的含 量甚微。
Goodman等人提出一种“后向旋转” 二肽酰胺的甜味模型,他们用NMR法 对丙氨酸酰胺(D-型[86]有甜味,L-型没有甜味)及其相应的“后向旋 转”酰胺(R-型[94]有甜味,S-型[95]有甜味)进行研究。假设肽键是 反式的且两性离子天冬氨酰基团的形状近似为一个平面,结合:①偶联常数 [J (VH」H>];②核极化效应;③温度对NH化学位移的影响这三方面的因 素,分析这些化合物的立体构象。通过计算所需的能量最低值,表明只有一种低 能量构象符合NMR的分析结果。图2 -84描绘了带有阿斯巴甜的甜味结合模型, 其中阿斯巴甜的构象与它在晶体结构中存在的构象很接近。阁2 - 84 连有阿斯巴甜分子的甜味结合模助 注:箭头所指的键由品体结构軔箭头方向旋转140%
P 必,—=(1 + 0 + a
1977年,美国一篇专利描述了可用铝盐来提高产品的稳定性、甜度与得率, 并使过滤操作更容易进行。但有些国家的法令不鼓励使用铝盐,特别是日本,嗦吗 甜终产品中铝的极限浓度为lOOmg/kg。1982年,英国-?篇专利描述了一种不用铝 盐的新方法,以提高产品的质量。

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