河口县安赛蜜

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质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响,更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基(LB)中培养一段时间后,加人IPTG后培养2~3h,大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大,多数在内含体沉积,在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后,大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后, 50%?70%融合蛋白发生解离,这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强,p/约5.4,而核酸酶碱性较强,p/9.4,因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同,甜度是植物提 取Brazzein的2倍,与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味,未折垒(unfolded)或折奋错误
时所感到的甜度要比此数值大或小。例如,与2%蔗糖溶液相比,它的甜度是40 倍,但与20%蔗糖溶液相比,其甜度只有24倍,这可能足由于髙浓度的甜蜜素 带来了苦后味的缘故。但这种苦后味只有在高浓度条件下才出现,通常使用范围 内不会感觉到。表6-2所示为在不同浓度下甜蜜素相对于蔗糖的甜度。总的说 来,甜蜜素的甜味特性甚佳。
芦-D-呋果聚糠 苷-办-D-咲嚙塔格期<2200 x> (205 x>图3 - 57 C-4'取代基构象对三氣蔗糖衍生物甜度的影响
注:反应条件:乳糖a28mol/L.甜叶愚钩子苷0. 14raol/L。
(3)氨基磺酸-三氧化硫法:由氨基磺酸(或其鈦)与双乙烯酮加成制得 中间体,再经三氧化硫闭环,最后用氢氧化钾中和而获得产品。
糖精钠是糖精的一种盐类,易溶于水,故也称可溶性糖精。糖精钠呈无色至 白色斜方晶系板状结晶或白色结晶性风化粉末,无臭或有轻微气味。甜味阈值约 0.00018% ,其水溶液浓度稀时呈甜味,浓时(大于0.026%)有苦味,故单独 使用时的浓度应低于0.02%。糖精钙盐娃另一种商业化生产的非营养型甜味剂, 为白色结晶状粉末,在水中溶解度为67g/100g,甜度为蔗糖的300倍。文献报道 糖精的其他盐类有银盐、铵盐、铜盐、锂盐和钾盐等,这些盐类虽然甜度也很 髙,但都没有商业化生产。
棉籽糖水解法没有分离上的问题,所使用的《-半乳糖苷酶也可以很经济地 获得,并以固定化的形式使用。同时,三氣蔗糖还可以从反应溶剂中被选择性地 结晶出来,从而使反应向正方向进行,并减少回收成本。可惜的是,目前棉籽糖 还未实现工业化生产,它必须从天然糖源(如甜菜糖蜜或棉籽粉〉中分离出来, 或经过a -半乳糖苷酶从半乳糖和蔗糖合成而得,因此无法满足工业化生产三氣 蔗糖对原料棉籽糖的需求。另一个突出的问题是,四氣化棉籽糖的水解速度很 慢,特别是要达到60% ~70%以上的水解率就需要更长的时间。
实验中对24h后积累在反应混合体系中的还原糖数量进行了测定。挤压膨胀 淀粉体系中只有0.34g/L,与液化淀粉的7.84g/L相比很小,环糊精葡糖基转移 梅催化挤压膨胀淀粉表面的非还原性端,因此还原糖代表的低聚麦芽糖的最较 小,因此甜菊苷转葡糖基得率较高。

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