西固区纽甜
阁2-丨2在不同pH下温度对阿斯巴甜 图2-13在25弋时pH与阿斯巴甜
从植物中分离得到的Brazzein有几种结构，其中主要构型中的末端氨基酸 是焦谷氨酸（pGlu)[围5-24 (1)]0另一构型除末端没有该氨基酸外，其 余均相同，称为de8-pGlul -Brazzein [图5-24 (2)]t它的甜度是主要构型 的Brazzein的2依。按des - pGlul - Brazzein的氣基酸序列采用大肠杆菌优选 密码子合成的基因如图5-24 (3)所示。合成的Bra^ein基因若直接克隆至 质粒 pET-3a、pET-9a、pET - 1 la 和 pET - 16b 得到的 Brazzein 表达水平均 很低，只有pET-3a和pET-9a得到少量可溶的Brazzein。pET载体通常能使 外源可溶性蛋白如葡萄球菌核酸酶表达，葡萄球菌核酸酶与Brazzein的显著不 同是葡萄球菌核酸酶的氨基酸数目>100，且没有半胱氨酸或半胱氨酸含S很 低。若采用两种基因融合生产目的蛋白融合体的表达水平较髙，因此将 Brazzein合成基因插人葡萄球菌核酸酶表达系统。该策略经大肠杆菌生产鸟类 卵黏蛋白区证实很成功。
尽管许多国家组织相继发表大量评论，明确表示甜诳素为安全物质，但0 前世界上对甜蜜索的安全性仍存在争议。美国FDA至今也没有最终的明确答 案。世界上有包括美国、日本等国在内的40多个国家仍规定禁止使用甜蜜素 作为髙效甜味剂。但中国、欧盟、澳大利亚、新西兰、南非等80多个国家均 允许使用。
在一个长达2年的动物喂养试验中，分别用0%、0.1%、0.3%和1%浓度 的纯度为95. 2%的甜菊苷喂养小白鼠，雄鼠喂养22个月，雌鼠喂养24个月， 然后取雄、雌鼠各10只进行临床和病理学分析。结果表明，0.3%剂量组雄、雌 鼠出现轻微的生长延迟现象，丨％剂量组出现短暂的生长停滞现象，所有试验组 和控制组在总体外观、悄感与行为方面均无多大差异。喂养6个月后尿液、血 液、血生化特性及器官重里发生了一系列的变化，但喂养丨2个月及最终的喂养 结果并没发现这些差别。肿瘤病变与否及其严重性均与甜菊苷的摄人水平没有直 接的关系。
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自从开始研究甜蜜素以来，人们至少已对它或它与糖精混合物进行了 30次 的致癌性试验研究。在这些试验中，实验组没显示任何具有统计学意义的膀胱癌 发病率。大量的有关大鼠、小鼠、狗和猴的饲养试验表明，摄取甜蜜素后，这些 动物并没发生癌变。即使口服大量的甜密素后，它们也未发生癌病变现象。在可 被接受的毒理学标准和科学的统计学分析基础上，所有这些试验结果足以得出 “甜蜜素不是动物的致癌物”这一结论。
已有几项专利描述了甜蜜素与阿斯巴甜、安赛蜜以及其他甜味剂的协同增效 作用。例如，Sea-描述阿斯巴甜、糖梢与甜蜜素混合使用改善饮料的口感和提 高消费者的可接受性。还有一项专利是关于甜蜜素、阿斯巴甜和糖精的混合物在 曰常食品中的应用。有人认为，甜蜜素与其他甜味剂共同作用，能起到增强甜 度、驱除不良感或味觉滞留现象的作用。
在pH9, W素6mol/L ,抚胺丨OOmmol/L、堪屮烷盐酸50mnol/L的绂 冲液屮进行Sephadcx G - 25柱（2.2cm x 45cm )凝皎过滤
图2 -78 Suosan及其同铟物的化学结构本味之素公司提出另一种对天冬氨酰基进行改进的方法，就是给W-端天 冬氨酰残基接上第三个氨基酸，制得甜三肽化合物。至于在C-端连接的三肽化 合物，将在下面讨论。在他们所制备的24种三肽中，最甜的一种是阿斯巴甜衍 生物[丨48],其甜度与阿斯巴甜一样，如表2-62所示。令人不解的是，从氨 基丙二酸同型物衍生来的三肽[149]却没有甜味，[丨50]之类的四肽化合物是 苦的，表明在甜受体上没有足够的空间来接受两个新增加的氨基酸。很显然，尽
Neoculin是NAS - NBS异形二聚体，而CurtmUn是NBS - NBS同型二聚体。 仙茅蛋白由两个相同的含有丨丨4个氨基酸残基的亚基组成的蛋白质，Neoculin为 一个由一条含有丨丨3个氨基酸残基的、糖基化的酸性亚基和一条碱性亚基（即 仙茅蛋白单体）组成的异型二聚体。
