绥阳县D-木糖

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质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响,更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基(LB)中培养一段时间后,加人IPTG后培养2~3h,大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大,多数在内含体沉积,在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后,大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后, 50%?70%融合蛋白发生解离,这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强,p/约5.4,而核酸酶碱性较强,p/9.4,因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同,甜度是植物提 取Brazzein的2倍,与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味,未折垒(unfolded)或折奋错误
尽管如此,AH、B、X甜味三角理论仍具有一些局限,它并不能解释所有的 甜味现象。而且,目前所有有关甜味分子构效关系的理论都是在已知的甜味分子 基础上构建而成的假设体系,它在解释已知甜味分子的作用机理上取得了较为满 意的结果,但在利用它来探索未知的甜味分子方面却还存在着差距。因此,AH、 B、X甜味三角理论仍然需要得到进一步的完善。
验的具体情况不明,所用的提取物样品也没得到很好的精制。
根据Kawahara的研究报道,纽甜晶体按照其X -射线衍射的特征峰的不同 可以分为A、B、D和G四种类型(表2-27)。这四种类型的晶体有着不同含水 萤,它们稳定性也存在差别,其中,A型晶体最稳定。将不同类型的晶体保存在 7(TC:下,观察它们的稳定性的试验,其结果见表2-28。Kawahara将刚从溶液中 结晶在一定的温度和湿度条件下进行晶型的转变得到霜要的A型晶体。刚从溶 液结晶分离出來的晶体为B型晶体,它在绝对湿度不高于0.203kg/kg、温度 25?8CTC时,就会迅速转变为A型晶体;D型晶体在绝对湿度不高于0.055kg/kg、 温度25-801时,也会迅速转变为A型晶体。在晶型转变过程中,温度和湿度 都要控制,不能过高也不能太低。过髙的温度会导致晶体的分解,温度过低则晶 型转变很难发生。同样,湿度不能高于设-值,湿度太髙会减慢晶型转变速度。
立体选择性催化氢解纽甜酯的脂肪酶和酯酶可以分别通过黑曲锥(Aspergillus niger)、米曲霉(AspergUlus oryzae)、南极洲假丝酵母(Candida anlarctica)、 柱状假丝酵母(Candida cylindracea)、产朊假丝酵母(Candida utiiis)、娄地靑祗 (Penicillium roqueforti) x 洋葱假第胞菌(Pscudomonas ccpacia)、少根根箱(Rhi- zopus arrhizm )、水生嗜热杆菌(Thermus aquaticus )、小麦胚芽、假单胞菌 (Pseudomonas sp. )、B 型假单胞傲(Pseudomonas sp. type B)、芽抱杆菌(Bacil- lus sp. ) x咕热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、猪肝、马肝、兔肝以 及酿酒酵母(Saccfmwmyces ce—、等获得。一般脂肪酶首选B型假单胞菌 (Pseudomonas sp. type B),醋酶首选从猪肝提取(表2 - 26) 0
(三)酵母嗦吗甜的提纯工艺
三、利用产朊假丝酵母生产莫奈林
把嗦吗甜添加于香烟的过滤嘴部分,能使烟味变得柔和。日本有篇专利就是 描述这个用途的,并已被R本数家烟草公司和日本盐烟垄断集团所采纳。

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