三都区甜菊糖
要在酵母中表达嗦吗甜，首先要合成相应的基因。为使基因能在酵母中高效 表达，采用酵母优选密码子合成嗦吗甜I基因，为便于操纵DNA序列，在嗦吗 甜基因设计时在序列中包含多个限制性酶切点。嗦吗甜I基因长度为630bP,它 的DNA序列的5'端和1端分别为Bel I位点和Xho I位点。嗦吗甜I合成基因经 直接定点突变或DNA片段替换合成嗦吗甜A、B基因。将嗦吗甜I基因113位 的天冬酰胺的密码子替换为天冬氨酸的密码子即得嗦吗甜A基因序列，随后将 嗦吗甜A基因46位的天冬酰胺的密码子替换为赖氨酸的密码子即得到嗦吗甜B 基因。
采用电穿孔法，将质粒转至产朊假丝酵母(Candida ulUis)中。该方法较简 单并能实现Candida utUis的高效转化。对转化条件进行优化以达到最优转化率。 据研究，酵母在最优电脉冲转化率下存活率为50% -70% ,因此通过调整场强、 内阻和电容大小，使Candida utUis的存活率达10%?70%。在加了4(Vg/mL CYH的YPD平板培养基上培养C— ulUis转化体（4(Vg/mL CYH是野生塑 Candida ulilis能在YPD培养基生长的最高浓度），进行CYH抗性转化体选择。 YPD培养基组成为：2%葡萄糖、l%BaCto酵母抽提物、2%Bacto蛋白胨。由于 电脉冲导致酵母细胞膜的破裂，使细胞对渗透压更敏感，因此电脉冲处理后细胞 立即在YPD培养基上培养不形成菌落D电脉冲处理后细胞立即分散在选择性培 养基，也不能得到CYH抗性菌落，需在30弋含lmol/L山梨糖醉的YPD培养基 上预培养一段时间后，再转移至含CYH的培养基才能得到转化子。
表2-8 各年龄阶段儿童苯丙氨酸的必擗摄取量表2 -9给出日常食品和以阿斯巴甜增甜饮料中的天冬氨酸、苯丙氨酸和甲 醇含量。从中可以看出，假设一瓶以阿斯巴甜增甜的碳酸饮料，其所含的阿斯巴 甜全部被人体代谢吸收，也只含有0.02%天冬氨酸、0.033%苯丙氨和 0.006%的甲醇，而一根香蕉就含有0.112%天冬氨酸、0.041%苯丙氨酸和0.018%甲醉u秘然，在食品中使用阿斯巴甜不会带来任何安全问题。表2-9 日常食品和用阿斯巴甜埔甜的碳酸饮料中天冬氨酸、苯丙氨酸和甲酵的典型含量
后来，由于甜蜜岽在各种食品、饮料中得到广泛的应用，美国其他几家公司 也开始生产，其中包括Pillsbnry公司、Pfizer Inc公司、美国甜密素股份有限公司 和Miles实验室等。在1970年禁用前，东亚的FJ本、韩国和我国台湾省也有 生产。
临床试验包括对健康男性用单一剂量范围从0.1到0.5m&/kg体重，连续8h 每小时重复给0.25mg/lcg体重的剂最（一天的总剂量为2mg/kg体重，在8h的 范围内相当于消耗掉20倍的预测的每日摄人量），以及给予健康男性和女性为 期丨3周的纽甜剂量从0.5到1.5mg/(kg*d)或安慰剂[1.5mg/(kg _ d)的纽 甜剂谊相当于每日消耗掉15倍的预测的每日摄人量](表2-31)。表2-32列 出了 13周试验的详细临床试验室指标。
人工合成甜味剂的缺点，集中体现在以下两点：
还有些试验报道发现了糖精的代谢产物2-氨磺酰苯甲酸及2-邻苯磺基苯 甲酸，但这些试验所用的放射元素标志水平较低，代谢物仅依靠单一的薄层色谱 (TLC)检测，作者对是否排除了色谱过程中可能形成的后生物并非很有把握。
蔗糖醚化和脱氧衍生物的甜度变化，也证实了以上推断的正确性。如蔗糖的 4 -脱氣、4 -0 -甲基衍生物均有甜味；而当蔗糖分子C -3'位上的羟基被酯化成 3#-0-乙酯蔗糖时，由干掩盖了生甜团的AH基团，因此生成物不具有甜味。这 些结果均与以上确定的蔗糖甜味三角形基团的结论一致。此外还发现，3-酮基-蔗 糖在甜度h和庶糖相似（保留有蔗糖AH、B双官能实体），而蔗糖C-3位上的差向 立体异构体异鹿糖则完全没有甜味。为此，我们甚至可以预测出3-0-甲基蔗糖成 该是甜的，而2 - 0 -甲基蔗糖衍生物如2 -脱氧蔗糖或2 -酮基-蔗糖必然不甜。
一、仙茅蛋白的化学结构
