田东县甜蜜素

田东县甜蜜素 4葡糖基化的研究发现,在丨3位引入2个 葡糖基后甜味特性明显改善,而在19位上引人 葡糖基则使甜味特性变差。甜菊醉双苷(结构式 如图4-6所示〉,经环糊精葡糖基转移酶…

田东县甜蜜素
4葡糖基化的研究发现,在丨3位引入2个 葡糖基后甜味特性明显改善,而在19位上引人 葡糖基则使甜味特性变差。甜菊醉双苷(结构式 如图4-6所示〉,经环糊精葡糖基转移酶催化在 13位引人葡糖基,其19位由半乳糖醋键保护,结 果发现增加1或2个葡糖基会使甜度有明显增加,
(一)利用半乳糖苷酶改性甜叶悬钩子苷
已有100多个试验结果证实了三氣蔗糖的食用安全性,没发现三氣蔗糖及其 副产物的任何不利影响。即使以很髙的剂最(丨6g/kg)喂养啮齿动物终生,也 可确认其安全、无毒性。而这个16g/kg的剂萤,相当于人体每天摄取1801碳酸 饮料所包含的三氣蔗糖数摄。
植物嗦吗甜甜味持续时间长,这对嗦吗甜的某些应用(如口香糖、牙裔等) 有益,但对大多数产品而言是不希望有的,其使用范围W此受到了限制。通过生 物技术改变嗦吗甜的氨基酸序列,得到的变种有望既保持植物蛋白质的甜味,又 缩短甜味持续时间。
研究甜味理论及其构效关系的目的,不仅在于阐明甜味的呈味机理,更重要 的是指导合成新型的人工甜味剂。近百年来,几种重要人工甜味剂的发现均出自 偶然的机遇,如1879年的糖精(Saccharine)、1883年的甘素(Dulcin)、1893 年的甜素(Gliicin)、1937年的甜蜜素(Cydanmte)和1965年的阿斯巴甜 (Aspartame)都是著名的偶然事件,而通过精心设计而成功发现的人工甜味剂则 几乎没有。
Akiko Shimizu – Ibuka首次对Neoculin的三级结构进行了详细的描述。八 条多肽链A至H组成了 AB、CD、EF和GH四个结晶学独立的异型二聚体 (in the asymmelric unit)。肽链 A、C、E 和 G 与 NAS 相对应,肽链 B、D、F 和H与NBS相对应。异型二聚体AB的总体结构如图5-26 (1)所示。亚 基NAS和NBS的结构非常相似。每一原体由3个排列于三棱柱表面的4链 召-折叠组成,并于结构中央附有一 pseudo three – fold axis (處拟三次轴)。 当中的三个折钱都是反平行的,第丨2个/3-链来自于另一个亚基[图5-26
C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶(GAP)基 因,其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 GAP基㈥克隆至6.5kh £co/U片段。起始密码子上游的Ikb片段(-976? -1,推断+丨为翻译起始位点)作为启动子,用引物在V端加上N?d位点, 在3’端加上Xbal和BamHI位点。终止密码子下游0.7kb片段(+ 1006? + 1728)作为终止子,用引物在V端加上BamHI位点,在V端加上Pst丨位点, 将两片段在pBluescript SK的No丨丨和Pst丨位点间连接,构建得质粒pGAPPTIO (图5 – 15)。含单链莫奈林的0RF的0. 3kb的Dral – Bgl D片段插至pGAPPTIO 的平头Xbal位点和BamHI位点之间构建得PGAPM3。含rDNA片段的表达质 粒如下构建:从pCLRE2 (图5-14)中分离得到的含部分rDNA的1.2kb Apal 片段插至pBluescript SK的Apal位点构建得质粒pCRAl。在pCRAl的Xhol切 割平头端连接上Sphl连接体构建得pCRA2,在pCRAl的Asp7丨8切割平头端 连接上Notl连接体构建得pCRA3。pCRA3的1.2kh rDNA切割为0.5kb和 0. 7kh Notl – Bgl n片段后连接到质粒pUCBgl的Bgl n位点,构建得质粒 pCRA10o其中质粒pUCBgl由pUC19经EcoRI和HindHI酶切,并在Klenow酶 切处理后在切点处连接Bgl D连接体构建得到。质粒pCRA2经Sphl和EcoRI 酶切后,与由PCLRE16分离得到的含CYH抗性基因的1. Ikl, Sphl – KcoRI片 段连接构述得pCLR216。质粒pCRAlO经Xhol和Ps丨I酶切后,与含CYH抗性 基因的丨.1比?311-5&丨1片段(-184?+974)连接,构建得到pCRALll。从 PGAPM3分离得到的含莫奈林表达盒的2. Okb Notl – PstI片段插至pCLR216的 Notl和PstI位点构逑的质粒PCLRM216 (图5 – 16),插至pCRALl 1的Not丨和 PstI位点间构建得到质粒pKMll (图5-16)。C. W/is的URA3基因经与 的ura3突变子减基互补克隆得到,用作整合目标。URA3的801bP ORF 的 区域(+4?+356)和 3’区域(+356 ~+685)分別为 SaH-Bgin 和Bgl丨丨-AsP718片段,这两个片段插至pUC19的Sail和AsP718构建得质粒 pURAl0在pURAl的Hindffl酶切端和Asp718酶切平头端加上Not丨连接体分 别构建得到pURA2和PURA3。从pURA2的5,端分离得Noll – Bgl H片段,从 PURA3的1端分离得BglD – Notl片段,两片段连接至质粒pUCBg丨的Bgin位 点构建pURAlO。含CYH抗性基因的1. lkb PstI – Sail片段插至pURAlO的Sail 和PstI位点间,构建得pURALl 1。含莫奈林表达盒得2. Okb的Notl – PstI片段 插至pURALll的1^11和?8|丨位点间构建质粒pUMll (图5-16)。
将这个反应用在蔗糖h可制得复杂的混合产物,在这里葡搪残基相成地转变 成4,6-二氣-半乳糖残基。在条件下,用蔗糖重复这一反应,然后通过色 谱分离获得得率不髙的1个四氣化和2个五氣化衍生物,这是由呋喃果糖苷单元 的反应演变而来的。果糖苻的反应产物经光谱特别是核磁共振鉴定后,得知一个 是3’,4′-环氧,另一个是y -烯,第三个是丨、4\ 6,-三氣化物(图

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