高陵区AK糖
为检测酵母嗦吗甜是否具有甜味构型开发了 WA检测方法（radioirmmmoassay, 放射免疫分析法）。小鼠接种纯嗦吗甜A后会产生单特异性抗体（monospecific antibodies),它的免疫血淸稀释约50000倍后能选择性地与天然（甜味）构型的嗦 吗甜发生反应，时非天然构型、变性嗦吗甜或嗦吗甜的肽段与抗体的结合能力远不 及天然嗦吗甜。RIA可测定的嗦鸣甜最低浓度为Ing/mL，敏感度约是感官品尝试 验的丨000倍，并且适用范围也更广，对粗提物等都可以测定。将溶于SDS的酵母 嗦吗甜经SDS凝胶电泳分离后转移至硝化纤维滤纸富集，用稀释2000倍的老鼠嗦 吗甜A血清抗体进行检测，发现富集后的变性嗦吗甜及其溶解在SDS中的部分都 能被该血清抗体识别，该被识別组分在电泳中与植物嗦吗甜一起发生迁移。但对酵 母提取物进行RIA分析，没有发现能发生交叉反应的可溶性蛋A质，这可能是由 于酵母细胞内的还原态环境使嗦呵甜的二硫键还原而使蛋A质发生变性沉淀，因而 细胞中就+存在天然水溶性的嗦吗甜。并且由于蛋白质N端没有连接分泌信号序 列，细胞不分泌蛋白质。
纯奇异果素含13.9%的糖，葡糖胺、甘露糖、半乳糖、木糖和岩藻糖的摩 尔比为3. 03:3. 00:0.69: 0.96: 2. 12。奇异果素的氨基酸序列分析已表明其分子 中的糖组分是与Asn-42和Asn-186相连的，这两个位点完全糖基化。连接的 寡糖主要由乙酰葡糖胺、甘餌糖、岩藻糖、半乳糖、木糖组成。Noriko Takahashi等对奇异果素的N连接寡糖具体结构及分布进行了研究，发现奇异果 素天冬酰胺连接的寡糖主要有5种结构，它们分布情况见表5 - 16。
通过将SCM基因克隆于带GADPH后动子和终止子的表达载体pGAP，然后 将其转化成S. DC04和DBY746,可生产出重组SCM及其突变体。利用
图6 - 9 80T时糖精钠的水解曲线
Boeslen等催化还原N -苄氧羰基-L - a -天冬氣肤-L -苯内氨酸-丨-甲 酯和3，3-二甲基丁醛制备纽甜。将一定摄的苄氧羰基-L-a-天冬氨 酰-L-苯丙氨酸-1 -甲酯和3，3-二甲基丁醛加人到甲醇与甲基异丁基甲酮 (甲醇含量为45% ~90%质量比）的混合溶剂中，同时加人2%?丨0%的碳钯催 化剂，先通氮气一段时间再通氢气反应，反应温度26~65t,常压下反应，反 应持续1?20h。反应结朿通人氮气终止反应。过滤去除催化剂，滤液中加入足 量的水，在旋转蒸发器上减压共沸蒸发去除有机溶剂甲醉和甲基异丁基平酮，蒸 发温度为25~7(TC,过高会有副产物的产生，过低则不容易去除有机溶剂。然 后冷却到40尤以下结晶得到目标产物纽甜，可以用冷水冲洗或重结晶制取更卨 纯度的纽甜，晶体在80T以下减压干燥。干燥温度高于80T可能会导致纽甜的分 解或副产物的形成。整个反应过程，副反应少，产率高（>95%)。类似的还有用 /V -甲酸签_ L _a _天冬氣醜-L-苯丙氣酸_ 1 _甲醋、N-甲基-L -a -天冬 氨酰-L-苯丙氨酸-1 -甲酯、苄基-L-a-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-1 -甲 酯、/V-对苯基径氧基碳基-L-cr-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-1 -甲酯等进行纽甜 制备。
纽甜保留了阿斯巴甜的许多优良特性，如纯正的甜味、良好的味觉分布与 风味增强性质、无能量、无致龋性、在酸性介质下稳定等。不仅如此，它还在 很多方面优于阿斯巴甜，如表2-21所示。在干燥的条件下，纽甜具有更长的
又有人提出了甜味分子的多点结合理论（如multipoint attachment theory, MPA)来解释蔗糖衍生物的甜味机理。根据这个理论，卩-蔗糖属于！},、B2、 AH,、AH2、XH,、XH2、G,、E_、G2' E2、G3、E3、G4、E4 类甜味剂。而蔗糖 的三氣或四氣衍生物，如4，r, 6f-三氣蔗糖（650x)和4，r, 4'，6'-四 溴半乳糖基蔗糖（7500 x>，则属于 B、AH,、AH2、XH2、G,、E,、G2、E2、 G3、E3、G4、E4类甜味剂。正是由于甜味分子与受体在B (C-4)部位作用增 强，且 G,、G4 (C-6,、C-l')或 G,、G2、C4 (C-6\ C-4\ C - T)的空 间构象更适合受体蛋白，因此这两种蔗糖衍生物的甜度比蔗糖强。
在双酶-化学联合法合成三氣蔗糖中，最值得关注的是优化G- 6 - a的发 酵条件以及改善糖和糖酯的分离技术，这将有助于提高该法的效率，因此，需要 对G-6 - a形成过程中的生物化学和生理学机制进行详细的研究以简化该操作。 而快速分析、良好的反应控制以及适时地终止反应，也是双酶-化学联合法合成 三氣庶糖所必需的。同时，以蔗糖为原料经微生物发酵作用，直接生成S-6-a 的方法相当诱人，在这方面值得花大力气加以研究。
最近，这一机理还通过基于人体序列的全面的建模得以证实。这三种甜味蛋 白结构的楔形表面都与人受体的大空穴吻合。为了测试这个空穴是否是甜味蛋白 惟一可能的结合部位，Morini等人首次对活性Aoc - AB和/或Aoc - BA受体的表 面以及Roo - AB和/或Roo - BA模型进行了对接计算。
图1 -29代谢塑受体质体活性位点与配体的结合方式Temussi等人所描述的模型阐明了甜味受体的两个原体的作用。由于T1R3 是甜味受体和鲜味受体所共有的，因此，人们很自然地就会把特异性的来源接至 活化的主要作用分别归结于两个受体的T1R2原体和T1R1原体。蛋白质的楔形 假设已经表明，T1R3在蛋白质与受体外部结合部位结合中起主要作用。随后， Morini等制作的详尽的逑模证明了两个原体在甜味受体的活性状态下均可容纳非 蛋白质配体，并且这一观点还得到了实验结果的支持。
