甘孜州三氯蔗糖

甘孜州三氯蔗糖
(二）甘草甜素的毒性作用甘草和甘草甜素属于天然品，在美国被列入GRAS (公认的安全物质），我 国的传统医学认为它还有解毒保肝的作用。对于纯净的甘草甜素，试验测得其半 数致死量U^-SOSrng/kg (小鼠，腹腔），但已有几项研究报道了大剂量甘草和 甘草甜素的副作用。如在一项研究中发现一妇女每天摄取甘草30 ~40g，持续9 个月后出现肌红蛋白尿病变，检测发现其血淸钾浓度仅有而氣浓 度却髙达68imn0l/L。后来，通过静脉输注补充氣化钾，状况大有改观。还有这 样一篇报道，一个70岁的妇女将甘草作为泻药服用2 ~3年，她每天摄人 94 ~ 141 mg甘草酸的钙和钾盐，检查发现其血淸中的钾浓度仅有l.llmmol/L，心 电图检查发现她患有严重的血钾过少病变（Hypokakemia)。通过静脉注射输人 钾和螺幽内酯才使病情有所缓解，作者认为她患有的严重血钾过少病变归因于其 对甘草不正常的过敏反应。
从枯草芽孢杆菌(SAtUis') NCIB 11871中分离得到的一种特异性果糖转移酶， 可以专一地将G-6-a转化为S-6-a,并获得得率较髙的S-6 - a。尽管这种特 异性果糖转移酶可能会受到G - 6 - a上乙酰基的位阻影响，但总的效果仍较为理 想。这种酶和通常所说的果糖基转移酶有关，但又有其特殊性。它不会通过重复地 转移果糖基单元形成果聚糖，而只能专一地将-?个果糖基单元转移到受体己糖单元 上得到二糖产物，这可能是W为该酶的活性中心太小以致不能容纳超过单糖大小的 糖分子受体，也可能是因为果糖基不是这种酶的最佳受体。因此，这种单糖专一性 的果糖转移酶，被定义为单糖专一性的果糖转移酶（EC2.4. 1.162)。
荷兰Unilevei?研究室的工作人员首先将二肽化合物的甜度与空间充填特性 (space-filling properties)联系起来。他们选择了 28种与阿斯巴甜相关的旁链各 不相同的二肽甲酯，用根据充分伸长构象而建立起的空间充填模型來分析分子的 长?度。旁链的大小和形状是通过测摄沉浸于模型中所排出40%甲醉水溶液的体 积而得知的。通过描绘分子大小、长度与甜度的关系曲线，可知一个二肽分子具 有甜味所要求的旁链长度在0.48 ~0.88rmi之间，体积大于0.03nm3。Heijden等 人以40种二肽甲酯为对象，应用三个物理参数进行多次回归分析。这三个参数 分别如下：
在大多数均匀的非水溶性有机溶剂中，可以用固体酶或经活化的聚乙烯乙二 醉修饰的酶进行肽的酶法合成^
转糖苷反应中的产物变化情况
Mortierella vinac.ea的a -半乳糖苷酶，可以催化棉子糖或蜜二糖和甜叶悬钩 子苷的混合体系，进行转半乳糖基反应，产物结构见表4-24。
(二）阿力甜的安全毒理学分析已在多种生物体（包括人体）身上进行过阿力甜的毒理试验，结果均表明阿 力甜作为食品甜味剂是安全无毒的。表2 -38所示为部分主要的毒理试验项目。
1991年，Timi和Nofre提出多点结合甜味理论。该理论认为，人体甜味蛋白 受体最少包含8个基本的识別部位，并与甜味分子上相应的结合部位发生相互作 用。这一理论也能用来解释AMP及其衍生物具有强力甜味的原因，如图2-89
甘茶甜素（Phylloduldn)是用酶水解法由虎±1：草科（Saxifragaceae)植物八 仙花 Hydrangea macrophylla Seringe var. thundergii ( Siebold ) Makino 叶子天然存在 的糖苷中分离出来的，它在叶子中的含最高达2. 36%。围绕着Phyllodulcin的分 离纯化，已申请了数个专利方法。有一种方法是利用甲醇或乙醇提取，通过调节 1>H及用氣仿抽提法去除色素及Hydrangenol ( Phyllodulcin的非甜同型物）等杂 质，然后用一种非极性溶剂在pHIO条件下进行选择性抽提，可得到髙纯度的 Phyllodulcin 产品。
C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶（GAP)基 因，其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 GAP基㈥克隆至6.5kh ￡co/U片段。起始密码子上游的Ikb片段（-976? -1，推断+丨为翻译起始位点）作为启动子，用引物在V端加上N?d位点， 在3'端加上Xbal和BamHI位点。终止密码子下游0.7kb片段（+ 1006? + 1728)作为终止子，用引物在V端加上BamHI位点，在V端加上Pst丨位点， 将两片段在pBluescript SK的No丨丨和Pst丨位点间连接，构建得质粒pGAPPTIO (图5 - 15)。含单链莫奈林的0RF的0. 3kb的Dral - Bgl D片段插至pGAPPTIO 的平头Xbal位点和BamHI位点之间构建得PGAPM3。含rDNA片段的表达质 粒如下构建：从pCLRE2 (图5-14)中分离得到的含部分rDNA的1.2kb Apal 片段插至pBluescript SK的Apal位点构建得质粒pCRAl。在pCRAl的Xhol切 割平头端连接上Sphl连接体构建得pCRA2，在pCRAl的Asp7丨8切割平头端 连接上Notl连接体构建得pCRA3。pCRA3的1.2kh rDNA切割为0.5kb和 0. 7kh Notl - Bgl n片段后连接到质粒pUCBgl的Bgl n位点，构建得质粒 pCRA10o其中质粒pUCBgl由pUC19经EcoRI和HindHI酶切，并在Klenow酶 切处理后在切点处连接Bgl D连接体构建得到。质粒pCRA2经Sphl和EcoRI 酶切后，与由PCLRE16分离得到的含CYH抗性基因的1. Ikl, Sphl - KcoRI片 段连接构述得pCLR216。质粒pCRAlO经Xhol和Ps丨I酶切后，与含CYH抗性 基因的丨.1比？311-5&丨1片段（-184?+974)连接，构建得到pCRALll。从 PGAPM3分离得到的含莫奈林表达盒的2. Okb Notl - PstI片段插至pCLR216的 Notl和PstI位点构逑的质粒PCLRM216 (图5 - 16),插至pCRALl 1的Not丨和 PstI位点间构建得到质粒pKMll (图5-16)。C. W/is的URA3基因经与 的ura3突变子减基互补克隆得到，用作整合目标。URA3的801bP ORF 的 区域（+4?+356)和 3'区域（+356 ~+685)分別为 SaH-Bgin 和Bgl丨丨-AsP718片段，这两个片段插至pUC19的Sail和AsP718构建得质粒 pURAl0在pURAl的Hindffl酶切端和Asp718酶切平头端加上Not丨连接体分 别构建得到pURA2和PURA3。从pURA2的5,端分离得Noll - Bgl H片段，从 PURA3的1端分离得BglD - Notl片段，两片段连接至质粒pUCBg丨的Bgin位 点构建pURAlO。含CYH抗性基因的1. lkb PstI - Sail片段插至pURAlO的Sail 和PstI位点间，构建得pURALl 1。含莫奈林表达盒得2. Okb的Notl - PstI片段 插至pURALll的1^11和？8|丨位点间构建质粒pUMll (图5-16)。