太湖县纽甜
图5 - 19 在非选择性培养箪培养50代后各转化体产物的SDS - PAGE图 注：箭头所指为单链莫奈林分子位
Ariyoshi等人提出-种不需保护天冬氨酸氨基团而直接合成阿斯巴甜的方 法。他们将L-天冬氨酸酐盐酸化物与4nu)l L-苯丙氨酸甲酯在氣乙烯之类有 机溶剂中发生缩合反应生成《-和芦-型Asp-PheOMe混合物。如前所述，这 种不带保护基的合成反应一般会出现很多副反应。但Ariyoshi等人通过优化反 应条件来克服这种闲难，成功地实现了无保护基合成反应，反应产宇达到 37%左右。这个研究还表明，通过溶解于稀盐酸溶液，是很容易将a-Asp- PheOMe从泠-异构体及其他副产物中分离出，且a - Asp - PheOMe ? HC1易于 结晶析出。
最初分离出马槟榔I和II两种组分，Liu等人进一步分离纯化，发现它有5 种同工蛋白，分别为马槟榔I、1-1、n、10和IV,原来所指的马槟榔1包括 了马槟榔丨、丨-1、in和iv。其中马槟榔n的热稳定性最高，人们对它的研究 也最多，在80T至少可保持48h甜味不被破坏，而其他同系物在80*C保持0.5h, 甜味即丧失，因而马槟榔U具有较高的开发价值。马槟榔的热稳定性（及由此 决定的甜味特性）与其他甜蛋白有较大不同，与某个氨基酸组成有关。如有研 究认为不同马槟榔类似物热稳定性的差别是由于B链47位上是精氨酸（热稳定 型）还是谷氨酸（热不稳定型）。
(一）甜蜜素的物化性质
阁5 - 8各质粒转化体嗦吗甜生产的时间-产铍图 (1>、（2)为嗦叫甜产ft; ?，TCDTh-4；參，TB2bl-44; ★, TCP-3；
(四）反应条件的优化
(-)L41基因的改造
C. masaikai Levi果实的种子经0. 5mol/LNaCl抽提、硫酸铵分级、CM - Seph- arose柱分离，并通过比较各组分的SDS - PAGE图和HPI.C的保留时间，可以得 到各组分。这样得到的样品纯度很髙，分离得到的马槟榔D在SDS -PAGE中， 只在分子质里141^1处有一条带。
此毒理学试验包括频繁的行为观察、体检和神经检查。试验对用在两代 试验中的动物进行了学习、光反射和惊跳反应等特殊的神经系统检测，对所 有的脑组织和外周神经都进行显微镜检查。试验表明，在使用剂萤数千倍于 90%的预测人体消耗摄的纽甜，并没有显示对这些指标有影响。同位素跟踪 标记法检测纽甜在大鼠体内的分布发现在脑和中枢神经系统内的剂童很低。 在大鼠、小鼠和狗所做毒理学试验中，采用了一系列的指标用来评价潜在的 免疫毒性。纽甜对白细胞记数（包括分类、总蛋白、白蛋白、血浆白蛋白/ 总蛋内的比例），以及脾和胸腺的重量都没有影响。睥、淋巴结、胸腺、与 肠道有关的淋巴组织和骨髓等在宏观和微观检查中都未发现异常。因此，即 便在动物的生命周期内给予极大剂量的纽甜也没有发现有神经毒性和免疫毒 性的证据。
总之，三肽化合物的甜度比大小相似的二肽化合物低。三肽分子之所以会损 失甜度，可能焙因为亲水性的增加以及构象的限制，使得其整体分子的形状与大 小均未处于最佳状态的缘故。Ariyoshi进一步研究了四肽和五肽化合物，在所研 究的14种四肽中有3种的甜度仅是蔗糖的0.5 ~5.0倍，7种五肽没有甜味（表 2-66)。这表明低聚肽的分子越大，接近甜受体就越困难。表2 -66 二-五肽化合物的结构与甜度
