平顶山市甘草甜素
1969年，由于甜蜜素可能的致癌作用，导致美同国家科学院研究委员会否 决了甜蜜素的公认安全物质的地位。这一决定的依据是一家位于纽约的Maspeth 食品医药研究室的某些实验结果。该研究室的实验原料不是单一的甜蜜素，而是 甜蜜素与糖精的混合物。但是，后来其他人重复这个实验时，并没得出与之相同 的结果。
用固定化酶催化合成肽的反应条件优化要考虑3个因素：间定化酶的稳定 性、反应时间和平衡得率。图2-25 (1)所示为a = 15时，固定在Amberlite XAD-7的嗜热菌蛋白酶稳定性、平衡得率、相对起始反应速率。裁体内部最优 pH为5~6。当PH <5时，起始反应速率低且酶不稳定；pH >6时，平衡得率急 剧下降。在大多数情况下，多孔载体内的pH只由底物和产物的缓冲作用决定， 用酸或碱中和的方法很难调节。这是阂定化酶以非水溶性有机溶剂为介质催化合]’可增加酶的稳定 性，但得率仍会逐渐下降。在CSTR整个反应器中，底物和产物浓度各处均 相等。
奇异果素还有风味增效特性，与其甜味增强特性一样受人重视，特别是应用 在口香糖、口腔清洁制品时更是如此。许多氨基酸类型的化合物，大多可产生风 味增效作用，比较常见的有：①单一氨基酸（谷氨酸钠）；②二肽（阿斯巴 甜）；③蛋白质（嗦吗甜）；④糖蛋白（奇异果素）。如何合理解释包含在这些 化合物分子中的风味增效机理，尚待人们的继续探索。
(三）酶反应的最优条件
2.计算机模拟识别
奇异果产于热带非洲西部加纳、刚果等地，是山榄科（Sapotaceae)植物 Richardella dulcifica Baehni 所结的果实，这种植物以前常称为 Synsepalum dulcificum DC。该植物属于灌木，生长比较缓慢，种植之后要过3 ~4年才能长到2.0 ~ 4.5m的成熟高度，此时开始在分枝处开花结果。典型果实长2cm，呈鲜红色的 椭岡球状。果皮内侧有一层较薄的果肉，果肉包围着一个橄榄状的大核，奇异果 素就存在于果肉中。
图5-21 MCL的三维分子模型 Cy8*Hi?残基都以棍状阁表示。在图中，C表示CyB，H表示HU。
(二）嗦吗甜的其他用途
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
