泸溪县纽甜
式中：《指有机相和水相的体积比（=UV^)，和/^分别指非电离形态的 羧酸和胺的分配系数，为在有机相的浓度与在水相中的浓度之比。由式（2-12)、 式（2-13)可知，a值增大或P,增大或匕增大时，增大，减小。 在这系统中，底物和产物在二相中的分配也会影响平衡常数，底物和产物侧链都不 带可电离基团时的反应平衡常数可由下式计算:
以2# (kg-d)浓度水平喂养怀孕小鼠6~15d，发现嗦吗甜没有致畸性。活 体外微生物基因诱变试验表明它没荷诱变活性。因为嗦吗甜是可溶性蛋白，有人W 此推测它在肠道内可能具有免疫活性，但经口试验没检测到它的任何免疫活性。
四、甜菊双糖伴的安全毒理学分析
表2 - 33所示为纽甜在一些典型应用中的一般用萤水平。由于在酸性pH范
给试验动物的膳食中添加的纽甜浓度超过0.05%?3. 50%的范围时，食物的 可口性就会降低，从而导致动物拒绝进食或食后溢出，这与所给的动物每千克体 重的纽甜剂量无关，而与膳食中纽甜的浓度有关。例如在13周的试验中，因为 随着动物体重的增加，膳食中纽甜的浓度要不断增加以维持试验要求的以千克体 重为基础的剂萤，所以当纽甜在睛食中的浓度从50g/kg (膳食的5%)降到 35g/kg (膳食的3.5%)时，狗实际上消耗了更多的纽甜。用纽甜对年幼大鼠 (1~13周）所进行的1年或2年的试验，没有发现与纽甜有关的食物消耗或食 物转换效率的改变，因为生长期的年幼动物当其生长的生理需要战胜了可口性差 的膳食时，它就会“饥不择食”。
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
其中，&是离子型和非离子型底物、产物的总分配系数，即底物、产物在水 相浓度与在有机相浓度之比。乙-八叩有2个电离常数1>/^,和#&，分别表示 Z - Asp的C端和羧酸侧链的电离常数。
和等。
(四）酵母嗦吗甜的分析
阿斯巴甜水溶液在一定的温度和酸性pH条件下，其酯键能被水解生成天冬 氨酰苯丙氨酸（Asp-Phe)和甲醇。在中性、碱性（pH >7)或受热条件下， 或经环化作用消去甲醇形成环天冬氨酰苯丙氨酸，即二酮基哌嗪（DKP)。最 终，天冬氨酰苯丙氨酸还会继续水解生成2个单独的氨基酸一天冬氨酸和苯丙 氨酸。
