青阳县甜菊糖
没有人会想到，从一种粗陋且长期被忽略的植物果实中，提取出的蛋白质化 合物竞然会有甜味，而且很可能是地球上至今为止已发现的最甜的天然物质，更 没有人想到它竟然还有良好的风味改良效果。这种令人惊讶的天然物质就是本章 要重点讨论的嗦吗甜，它巳实现工业化生产并进人实用阶段。
波兰的研究者对L -天冬氨酰-1.-蛋氨酸甲酯旁链的构象优先性作了研究, 认为FBDn是优先存在的构象。他们还认为，FnDn也是阿斯巴甜优先存在的 构象。
后来，AntondU Paladino等人还对奇异果素二聚物进行了分子动力学模拟， 其结果表明，甜味蛋白通过其碱性表面与甜味受体的带电的空穴的相互作用来产 生活性，这和之前所提的一个假设一致。
在一个系列试验中，将新橙皮苷二氢查3酮分别以5%浓度水平喂养大鼠 22~170d, 5%浓度喂养12个月，或以10%浓度喂养11个月。结果发现10%试 验组动物出现生长受抑制现象。另一试验分别以含0%、0.5%、2. 5%和5.0% 新橙皮苷二氢查耳酮的饲料喂养大鼠2年进行致癌性研究，结果没发现任何与剂 量有关的癌变现象，但5.0%试验组动物的生长速率有所下降。当往这组动物饲 料中添加些矿物质和啤酒酵母时，发现动物生长速度重新增长，100周后就看不 出有什么区别了。在一个三代繁飱试验中没发现摄取二氧查耳酮有任何有害作 用，也未发现任何致畸作用。
我国广西一带有将尺.suariwiVmts的叶子加工成甜茶 化学结构图 饮用的传统，当地居民还冇将植物叶子的水浸出液与米粉一起混合制作糕点。近 些年来，民间还使用这种甜茶治疗糖尿病、商血压和肥胖症等。大鼠口服Rubii- soside进行的急性毒理试验，测得其半数致死量大约为2.4g/kg。在亚急性 毒理试验中，以！!)《>剂虽的10%添入饲料中喂养大鼠60d，未发现明显的毒性或 副影响。然而Rubusoside的糖苷配基楚甜菊醇Steviol ( 13 -羟基异贝壳杉烯酸）， 经代谢活化的Steviol在体外试验时发现有诱变活性，值得注意。有关Steviol的’ 诱变性参见本章第-节的详细讨论。
从植物中分离得到的Brazzein有几种结构，其中主要构型中的末端氨基酸 是焦谷氨酸（pGlu)[围5-24 (1)]0另一构型除末端没有该氨基酸外，其 余均相同，称为de8-pGlul -Brazzein [图5-24 (2)]t它的甜度是主要构型 的Brazzein的2依。按des - pGlul - Brazzein的氣基酸序列采用大肠杆菌优选 密码子合成的基因如图5-24 (3)所示。合成的Bra^ein基因若直接克隆至 质粒 pET-3a、pET-9a、pET - 1 la 和 pET - 16b 得到的 Brazzein 表达水平均 很低，只有pET-3a和pET-9a得到少量可溶的Brazzein。pET载体通常能使 外源可溶性蛋白如葡萄球菌核酸酶表达，葡萄球菌核酸酶与Brazzein的显著不 同是葡萄球菌核酸酶的氨基酸数目>100，且没有半胱氨酸或半胱氨酸含S很 低。若采用两种基因融合生产目的蛋白融合体的表达水平较髙，因此将 Brazzein合成基因插人葡萄球菌核酸酶表达系统。该策略经大肠杆菌生产鸟类 卵黏蛋白区证实很成功。
此法美国Abbott Laboratories对此做过研究。反应路线短，原料易得，但反 应条件苛刻，且需昂贵的钌催化剂。
四、奇异果素的生产技术
表4-21 底物浓度对环状芽孢杆菌的/?-半乳糖苷酶
