新宁县乳糖醇
(5)由于甜蜜素的渗透性，大量食用会出现粪便变软现象，但很多研究表 明它不引起任何有关肠病变等现象u
Temussi的模型最初是受到阿斯巴甜溶液构象的启发而建立的。但是，不久 后便发现，由于阿斯巴甜的结构太容易变化，因此并不适合用来作模型。而活性 位点模型，尽管与阿斯巴甜的溶液构象一致，却是在更为刚性的分子的基础上建
在不同条件下蔗糖水解反应的实验值及拟合结果如图4-23所示。可以看出，各 条件下的拟合结果和实验值吻合。蔗糖起始浓度为40mol/m3 [图4-23 (2)所示] 时，G和F浓度的实验值与计算值有微小差别，这可能是因为部分F异构化为G。
人们对新橙皮苷二氢奄耳酮在不同温度和pH下的稳定性情况也做了研究。 在室温水溶液中，pH大于2时，n不会水解生成游离单糖和糖苷。即使有时发 生水解现象也不会完全失去甜味，因为橙皮素二氢査耳酮也有甜味，尽管溶解度 不大。n在loot、pH2~10的缓冲液中至少可以稳定8h。根据实验的结果，新 橙皮二氢查耳酮水溶液室温下见光保存几年后，颜色略为变黄，但几乎觉察不出 甜味有何变化。
二、脲衍生物
Searie公司的研究人员最早对二肽分子的结构差异做丫研究，发现C -端氨 基酸可用一系列简单的胺分子来替代。为叙述方便，通常将二肽分子的结构特性 归纳为纸平面上的两个基团R,和R2, R,指“上面”基团，比指“下面”基团。 如表2-41所示，化合物[2]是由苄胺衍生而来的，缺少a-取代基R,,所以 没有甜味。由苯异丙胺衍生而得的氨化物[3]具有甜味，这说明酯基团并不是 必需的。同样是由苯异丙胺衍生的氨化物[4]却无甜味，这与阿斯巴甜甜二肽 分子L-或D-苯丙氨酸所表现的差异性，反映出对立体化学的要求是一致的。 在表2-41列出的K,基团（H、CH2OH)中，甲基具有的甜度最大，这表明较
(1)嗜热菌蛋白酶（Thmnolysin)丨sowa等人发现一种金属蛋白酶——嗜 热菌蛋1^1酶（EC3. 4.24.4)，可以催化侧链羧酸不带保护基团的Z - Asp和 PheOMe,合成阿斯巴甜前体A'’ -苄氧羰基-L -天冬氨酰-L -苯丙氨酸甲酯 (Z-ASp-PheOMe),见式（2-18〉。在所有关于酶法合成阿斯巴甜前体的报道 中，均采用嗜热菌蛋白酶催化。
图3-37各种有机溶剂对TCR转化成三氣蔗糖的影响 Christopher Bennett等人齊对从从vinacea和思曲潘(A. niger )中获得的 ?-半乳糖苷酶，进行提高水解反应速度的试验，包括使用表面活性剂、增加离 子强度和提髙反应温度等。前两种方法均不成功，但发现当pH为5.0?5. 5、反 应温度为551时，酶的失活和反应速率处于最佳平衡状态。此时，歸.vinacea 中获得的a-半乳糖苷酶，对TCR水解反应的& =5.8mmol/L，最高速率
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
