维西县罗汉果苷
过在60弋保持lOmin，然后在4t、pH4.5条件下保持lh,可得接近单一组分的 莫奈林（经SDS - PAGE测定）。通过离子交换柱可进一步纯化，得率约为 100mg/10g湿酵母（700mg可溶蛋白〉。提纯得到的萸奈林与天然莫奈林甜度一 样，阈值丨网，通过CD光谱分析比较重组莫奈林和天然莫奈林的二级结构单 元，因此可以预料两者必然有相同的三级结构。
(四）反应条件的优化
在我国，有人先后选用了毕赤酵母系统中的分泌型表达载体pPIC 9K及胞内 表达载体PP1C3.5K进行莫奈林表达，结果是，分泌型表达菌株能较高地表达莫 奈林，但没有甜味活性，而胞内表达的英奈林有活性，其产最达到1.8g/L。
Lelj等人结合使用NMK与分子力学计算法探讨阿斯巴甜构象优先性。首先 通过分析CHCH2碎片ABX质子的NMR偶合常数来分析旁链的构象优先性，然 后计弊出每个参差构象（staggered confonnalions,图2 -82)的相对密度。天冬 氨酰残基的参差构象（Di ~Db)与苯丙氨酸残基的参差构象（Fi ~Fn)是相 反的，天冬氨酰残基偏于Dd构象。另外两个参差构象，有一个（I),)携带反 式的NH/和COf基团，不能同时与甜受体形成氢键；另一个（Db)则充满了 大取代基。对于苯丙氨酸残基来说，根据苯基团优先偏于甲基酯而不是天冬氨酰 基团的立体直观观察事实，可推定它优先存在的构象是F:而不是FDt5 NMR分 析表明，苯丙氨酸C (/3) H2质子反向连接于该优先存在的构象上。还有一个参 差构象Fb，则充满大取代基。
Q LiCl m M?ONa
同时，控制反应条件不仅要保证单酯化衍生物占主要地位，而且要使酯化反 应尽可能地在C-6位上发生。蔗糖的酯化反应中可优先起反应的是C-6、r和 6,位羟基，各羟基反应的活泼次序是C-6、6'>r>2。因C-6聒性与C-6位 相当，得到的只能是既有C -6'位取代又有C -6位取代及少许其他位取代的单 双蔗糖酯混合物。因此，还必须通过严格控制反应条件（如蔗糖和乙酸酐的反 应比例、反应温度和时间等），以使单酯化反应尽可能地发生在蔗糖C-6位上。
C-6位羟基的单基团保护是本制备法的核心步骤，要求所形成的中间产物 对氣化试剂稳定，而又易于脱除。其中，最适用的方法是酯类保护法，因为它兼 具引入方便、在所需反应条件下稳定以及易于除去等优点。通常选择羧酸的活泼 衍生物作为酯化试剂，其中最常用的是酰基酐或酰基卤。对蔗糖来说，形成乙酸 酯或其他羧酸酯娃最有效的保护醉羟基方法，这可以使它在随后的酸性条件中不 受影响。
表2 -24 符合下列通式化合物的结构与甜度的相互关系
