兰陵县爱德万甜
第一节嗦吗甜
由于T1R2-T1R3受体和mGluRl的序列之间具有足够的相似性，因此可以 由此建立模型。似乎这也就足以猜测甜味受体也有和mGluRl —样的总体特征。 Kunishima等人的研究结果表明，mGluRl的胞外N端区域有三种不同的结晶形 态：一种是与配体复合的形态（lewk.pdb);另外两种则不带配体，分别是自由 态I (lewLpdh)和自由态II (lewv?丨xlb)。自由态I是和复合态显著不同的“非活 性”的构象，自由态n则是与具有“活性”复合态几乎一样的构象，两者处于平衡 状态。如果受体T1R2-T1R3像mGluRl那样变化，那么它也应该存在三种不同的 形态：含小分子质虽甜味剂（与谷氨酸分子相应）的复合态、自由态I——“非活 性”构象和自由态n——具有和“活性”复合态几乎一样的结构。
中数日。收集，水洗，再用lOOOmL水进行重结晶，干燥后可得晶体206g (熔点 150g),得率约82%。若再用甲醇重结晶一次，可得晶体199g (熔点 172-174*00为了最大限度地提髙纯度，最好再用甲醇敢结晶一次。
质粒pCLRM216、pRMll、pUMll的转化体，在lOmLYPD培养基中培养后, 均能产生莫奈林。凝胶定虽扫描表明，奐奈林在pUMll转化体中的表达世，超 过可溶蛋白的50%。以141基因为探针对转化体进行DNA印迹分析，测定 pCLKM216的整合拷贝数为10?丨丨，PRM丨丨为12~丨8，pUMll为20?22。经 DNA印迹分析，确走pKMH和pUMll中没有细菌序列。
NHSO,H ? N(C2H5)j NHSOjH ? N(CjH，）,
研究人员猜测，Neoculin特有的在B11和B12之间的C端环，可能在甜味产 生和味道修饰作用中起一定的作用。在连接/S-链的其他环中，Neoculin特有的 氨基酸序列主要位于四个环——L2-3、L4-5、1^-7和19-10中。尤其在 NBS中，位于12-3、L4-5和L6-7三个环的六个碱性残基于分子表面组成一 个大碱性区域，这一特征使得Neoculin表面的静电势分布明显有别于植物凝集素 中的。研究人员猜测，这个结构群有可能参与了 Neoculin的甜味产生和味道修饰 作用。
螺旋体。这个三维模型是在手性的基础上，根据结构、甜味的构效关系推导 而得的，因为一个随意盘绕的蛋白质，并不能全部满足手性甜味分子的要求。其 次，考虑到甜味感觉对底物的要求，撖盖了从小如CHC1,分子，到大如多肽和大 分子蛋白质的宽广范围，因此认为，甜味化合物和甜味蛋白受体之间最初的相互 作用，只发生在受体的表面部分，并以能量最低的方式结合。它们之间更深层次 的结合，很可能发生在甜味蛋白受体盘绕的多肽链中的“嵴”或“裂缝”处, 正如许多酶的活性部位。这种三维模型，可以解释H前已知的所有甜味化合物的
对阿斯巴甜及阿斯巴甜盐酸化物的晶体结构作了分析，沿着肽主链的键几乎 都是反式的。根据Goodman等人上述的观点，阿斯巴甜旁链优先存在的构象是 F.D,,而阿斯巴甜盐酸盐优先存在的构象是FBDI。在天冬氨酰羧基 和胺基呈反式存在，因此不是活性构象。相反，Gorbhz认为FuDi是活性构象， 因为它最符合Kier的甜味三角形模式。然而，Kier的三角形模式是根据硝基苯 胺而不是二肽确立的。Heijden等人认为二肽的甜味三角形要比硝基苯胺的大， 因此FnDB构象最符合。另一密切相关的化合物是阿斯巴甜的LiBr复合物，结晶 状态以F,D■为优先构象，所以在固体状态下，阿斯巴甜及其HC1盐、UBr盐的 优先存在构象均不一样。
2.底物浓度对反应过程的影响
在莫奈林蛋白质分子中，以a-螺旋结构形式存在的比例较小，以於-折奋 构象存在的比例则较大。如图5-10所示的三级结构中，A链与B链可看作是两 个不同的区域，A链含有1个螺旋结构和丨个於-折叠结构，而B链包含3 个泠-折叠结构和丨个/3-螺旋结构。
