浏阳市甜菊糖苷
图1 - 32 Brazzein和嗦吗甜与受体活性形态——Aoc - AB的对接的比较 (1)通过对接计算而得的两个Aoc - AB和15个Braacin分子结合的观察阳 (淡绿色部分为T1R2,深绿色郎分为T1R3, 部分为Braoein分子）
如图3 -22所示，Vilsmeier试剂是一种较好的氯代试剂，其优点表现在制备 容易和选择性较好，它可安全有效地氣化蔗糖分子4、r和&位，理论得率可达 80%以上。Vilsmeier试剂枭由无机酸氣化物与化学式为R2NCOX的义W - 二烷 基胺（如二甲基甲酰胺、二乙基乙酰胺）反应制得，其中X代表氢原子或甲基， R代表烷基。通常使用的无机酸氣化物有无氣化磷、光气和氣化亚砜等。
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
后来，Heijden等人通过应用Sterimo丨计算机程序计算出旁链原子距A、H和 B的距离，对上述数据作了优化。同时，还对甜味分子旁链长度的最大值、最佳 值和最小值作了估算。对于两种给定的构象Fn Dn和F, (图2 -82和 图2-83),表2-69所示为其疏水键合位X距AH-B处的最佳距离。S是X到 A、H和B处的最短距离
6-14所示。甲基氨茴酸酯与亚硝酸钠和盐酸发生重氮化作用生成2 -甲酯基苯 氣重氮化合物，再经磺化生成2-甲酯基苯亚磺酸，然后与氣气作用转化成2 -甲
醚键娃相当稳定的，但强无机酸和其具有未共用电子对的氧原子形成徉盐， 使醚分子的C一O键变弱，因此在酸性试剂的作用下醚键会断裂。使醚键断裂的 最有效试剂为浓氢卤酸，浓氢碘酸的作用最强，在常温下就可使醚键断裂而生成 碘化烷与醉。但在过量氢碘酸存在下，所生成的醇进一步所应生成碘代烷。醚键 的断裂，一般是在含碳原子较少的烷基处断裂，但由于叔正碳离子较稳定且容易 生成，故醚键在一ch2hc (c6h5)3处断裂。
表3-12 柠樣碳酸饮料配方
图3-6 2CTC时三氣蔗糖水济液 (0. 1% )在不同pH环境中的稳定性图3-7 751时三氣鹿糖水溶液（(X丨％) 在不同pH环境中的稳定性
糖苷一般不具备甜味，多少还带点苦味。具有较髙甜味的糖苷在自然界中数 虽不多，可作为甜味剂资源加以开发的种类就更少了。本章将要讨论的糖苷化合 物都具有较大的实用价值或应用前景，其中有些已实现商业化生产并进入实用阶 段，有的则是天然糖苷的化学改性产品。
添加有机助溶剂只增加了 P&,而如果能在P&增加同时减小P&,平衡得 率会增加更多。由Klibanov等人开发的水/有机溶剂二相体系可以实现这一点。 二相中有机相为水不溶性或在水中溶解度很小的有机溶剂，另-相为含酶的水 相。在水溶液中，羧酸和胺大部分以离子形态存在。在这二相体系中，假定溶解 在有机相中的都是非离子形态，且R,、K2没冇可电离的基团，则羧酸和胺的二 相电离平衡常数和可用下式计算：
