金口河区木糖醇
应，然后加入适话的亚硫酸氢钠溶液，料液转稀后，再加入热水溶解，静置后分 离、过滤，分取油层得邻氨基苯甲酸甲酯（简称甲酯）。先将由水、硫酸与盐酸 配制好的混酸置于重氮锅内，冷却后开始缓加甲酯和亚硝酸钠溶液的混合液，觅 氮温度保持在25T以下，反应终点时淀粉碘化钾溶液显淡紫色，产物为邻硫酸 (盐酸）觅氮苯甲酸甲酯溶液（简称重氮液）。
嗦吗甜呈白色或奶油色无定形粉末，甜味爽口，无异味，甜刺激持续时间 长。它极易溶于水，可配制出浓度高达60%的水溶液。lOOmL这种溶液可使301 水变甜，由此可见其甜度很大。嗦吗甜在含水有机溶剂（如乙醇、异丙醇、甘
Brazzein具有高度的热稳定性，目前所获得的NMR结构淸楚显示了这一分 子特性的结构基础。Bra^dn具有4对二硫键，Kohmimi M等以嗜热菌蛋白酶酶 解法结合质谱法测定Brazzein的4个二硫键分别位于蛋白分子内Cy?4 -Cys52、 Cysl6 - Cy?37、Cys22 - Cys47、Cys26 - Cyre49 区域，其交联作用使 Brazzein 整个 分子紧密折狰，如图5-22所示。二硫键Cys22 - Cys47和Cys26 - Cys49将a螺 旋固定于芦折香的链11 (strand D )(残基44?50), 二硫键Cysl6 - Cys37将 310锞旋固定于折盎的链HI (strand ID)(残基34~39),分子的N端和C端也 通过二硫键Cys4-Cys52相交联^正是通过这种二硫键的交联作用，使Brazzein 整个分子紧密折魯成一牢固的空间结构，从而产生优异的耐热性能o
②C-6位羟基化学保护法（单基团保护法）；
奇异果素单链中有7个半胱氨酸，Hiroshi Igeta等研究认为它们构成了 3 个链内二硫键和一个链间二硫键3 Cvs-47和Cys-92、Cys - 148和Cys-159、 Cys-152和Cys - 155形成了三个二硫键，Cys - 138参与形成一个链间二 硫键。
(一）嗦吗甜的一级与二级结构（氨基酸的组成与颠序}
(一）甲苯法
首先，制备乙酰乙酰胺磺酸三乙胺盐。将4.85g (0. 050mol)氨基磺
奇异果素存在于果浆，不溶于水。曾有研究用含有高碱性化合物如鲑精蛋白 (Salmine)或精胺的碳酸盐缓冲液（PH10.5)进行提取，这样容易导致变味活 力的下降，而且溶解了多种很难去除的深色物质，无法得到高纯度的样品。奇异 果素能用0. 5mol/L酸性NaCI溶液提取，这样得到的奇异果素在酸性pH中很稳 定，并且提取液无色。Sarroch Theerasilp和Yoshie Kurihara开发了奇异果素的提 纯工艺：冻干的果浆中的活性成分经0.5mol/L NaCI酸性溶液溶解抽提后用 (NH4)2S04分级沉淀，沉淀再经CM - Sepharose离子交换色谱和CcmA - Sepha- rose 4B柱提纯。用该方法得到的奇异果素纯度非常髙，得率为20g冻干果浆提 取得到36mg产品（表5-18)。
