长丰县阿拉伯糖
这意味着曲线没有平稳区域。因此，有序不可逆历程（图1-26机理3) 似乎最能解释心物学研究得到的各种数据。主观强度（汾）与浓度关系曲线具有 伸长的最大强度平稳区域（图1-27)，它证实上面提出的这个结论的正确性， 这条曲线与机理2有些出入。
Brazzein最早由Ming和Henekant于1994年分离得到，它是从非洲植物Pen- tadiplandra Brazzeana Baillon的果实中提取得到的可溶性甜蛋白，甜度是鹿糖的 500倍，后味比糖精弱。
(二} Brazzein的甜味特性
C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶（GAP)基 因，其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 GAP基㈥克隆至6.5kh ￡co/U片段。起始密码子上游的Ikb片段（-976? -1，推断+丨为翻译起始位点）作为启动子，用引物在V端加上N?d位点， 在3'端加上Xbal和BamHI位点。终止密码子下游0.7kb片段（+ 1006? + 1728)作为终止子，用引物在V端加上BamHI位点，在V端加上Pst丨位点， 将两片段在pBluescript SK的No丨丨和Pst丨位点间连接，构建得质粒pGAPPTIO (图5 - 15)。含单链莫奈林的0RF的0. 3kb的Dral - Bgl D片段插至pGAPPTIO 的平头Xbal位点和BamHI位点之间构建得PGAPM3。含rDNA片段的表达质 粒如下构建：从pCLRE2 (图5-14)中分离得到的含部分rDNA的1.2kb Apal 片段插至pBluescript SK的Apal位点构建得质粒pCRAl。在pCRAl的Xhol切 割平头端连接上Sphl连接体构建得pCRA2，在pCRAl的Asp7丨8切割平头端 连接上Notl连接体构建得pCRA3。pCRA3的1.2kh rDNA切割为0.5kb和 0. 7kh Notl - Bgl n片段后连接到质粒pUCBgl的Bgl n位点，构建得质粒 pCRA10o其中质粒pUCBgl由pUC19经EcoRI和HindHI酶切，并在Klenow酶 切处理后在切点处连接Bgl D连接体构建得到。质粒pCRA2经Sphl和EcoRI 酶切后，与由PCLRE16分离得到的含CYH抗性基因的1. Ikl, Sphl - KcoRI片 段连接构述得pCLR216。质粒pCRAlO经Xhol和Ps丨I酶切后，与含CYH抗性 基因的丨.1比？311-5&丨1片段（-184?+974)连接，构建得到pCRALll。从 PGAPM3分离得到的含莫奈林表达盒的2. Okb Notl - PstI片段插至pCLR216的 Notl和PstI位点构逑的质粒PCLRM216 (图5 - 16),插至pCRALl 1的Not丨和 PstI位点间构建得到质粒pKMll (图5-16)。C. W/is的URA3基因经与 的ura3突变子减基互补克隆得到，用作整合目标。URA3的801bP ORF 的 区域（+4?+356)和 3'区域（+356 ~+685)分別为 SaH-Bgin 和Bgl丨丨-AsP718片段，这两个片段插至pUC19的Sail和AsP718构建得质粒 pURAl0在pURAl的Hindffl酶切端和Asp718酶切平头端加上Not丨连接体分 别构建得到pURA2和PURA3。从pURA2的5,端分离得Noll - Bgl H片段，从 PURA3的1端分离得BglD - Notl片段，两片段连接至质粒pUCBg丨的Bgin位 点构建pURAlO。含CYH抗性基因的1. lkb PstI - Sail片段插至pURAlO的Sail 和PstI位点间，构建得pURALl 1。含莫奈林表达盒得2. Okb的Notl - PstI片段 插至pURALll的1^11和？8|丨位点间构建质粒pUMll (图5-16)。
表4 -17 二氢査耳酮甜味剂及其来源
棉籽糖水解法没有分离上的问题，所使用的《-半乳糖苷酶也可以很经济地 获得，并以固定化的形式使用。同时，三氣蔗糖还可以从反应溶剂中被选择性地 结晶出来，从而使反应向正方向进行，并减少回收成本。可惜的是，目前棉籽糖 还未实现工业化生产，它必须从天然糖源（如甜菜糖蜜或棉籽粉〉中分离出来， 或经过a -半乳糖苷酶从半乳糖和蔗糖合成而得，因此无法满足工业化生产三氣 蔗糖对原料棉籽糖的需求。另一个突出的问题是，四氣化棉籽糖的水解速度很 慢，特别是要达到60% ~70%以上的水解率就需要更长的时间。
KJM 性酶切点缩写：Af = 4/ B ; B = BamH I ； C = Clo I ； E : EcoR I ； H = Hind IB； Hp = W/w I : P = Pst I ； Pv = Pm 0 ; R V = EcoR V ; S s Sa n ; Sc = Sac I ; Sc D = Sac D ; X = Xba I ； XhnXho I 0
