江油市低聚果糖
(四）致突变试验
四、甜菊双糖伴的安全毒理学分析
曾尝试在大肠杆菌中表达重组奇异果素。在表达载体中插人以化学法合成的 奇异果素基因，所得的载体即转化成大肠杆菌菌株HB101。尽管通过SDS - PAGE和Western印迹分析可检测到重组奇异果素的存在，但是，所得的通组奇 异果素并不具味道修饰作用。在酵母和转基因烟草中的尝试结果也一样，尽管都 成功地表达出了重组奇异果素，但是产物也不具备甜味诱导活性。
用细菌和哺乳动物进行的体内和体外试验表明，阿力甜在基因或染色体水平 上没有毒性（genotoxichy)。在药学领域所进行的-?系列研究表明阿力甜对机体 肠H、贤、中央神经系统功能及自主评价行为（assess mitonomic)没有任何影 响，对空腹血糖水平及口服葡萄糖的分布没有影响。
一、纽甜的化学结构
其中，嗜热菌蛋白酶的吸附影响可以忽略不计；因为合成速度比底物和产物 的扩散速度慢，所以界面的物质传递影响也可忽略不计；水相pH变化可由底物 产物分配比及在电中性时的解离平衡常数计算得到。
阿斯巴甜分子中的生甜闭尽管AH、B甜味理论能够很好地解释已知的所有甜味化合物的甜味特性， 但这种理论仍然遇到了诸多挑战：①虽然在甜味分子中都可以找到适当的AH、B体系，但许多拥有AH、B 体系的化合物并不甜。②AH、B理论可以解释甜味剂的甜味特性，却不能解释高效甜味剂的高效 甜味特性。1972年Kier在研究1 -烷氧基-2-氨基-4-硝基苯（图丨-7)时，引人 了另一分子特征即疏水（亲油）结合基团X,于是形成了甜味三角形理论 (AH、B、X理论）Q X距离AH的A约0.35nm，距离B约0.55nm。后来Hough 也认为除AH、B系统外，还应有一个亲油性或疏水性的第三连接点，这就承认 了 Kier的甜味三角形理论（图1-8)。Shallenberger本人也修改了他的理论，用 一个三角形概念来描述对映体的甜味（图丨-9)。丨-烷氧基-2-氨基-4-硝 基苯的高甜度可以解释为其1位基团的极化性，这个1位是“第三连接点X”， 它和硝基（B)、邻位的氢（AH)联合产生甜味。在D-氨基酸中，缬氨酸、亮 氨酸、色氨酸和苯丙氨酸都具有比较强的甜味，这是由于它们都含有疏水基的缘 故。因为甜味分子的琉水性基能与甜受体膜的疏水性部位相结合，使甜味分子易于 被甜受体膜所吸附。可以认为，亲油-亲水平衡是决定一种分子甜度的重要因素。
Lamphear等通过转基因玉米生产Brazzein，获得了产萤髙达AOO^g/g种子的 重组Brazzein。研究人员已合成了 Brazzein基因，并把基因融合于植物表达载体， 如组成型启动子（maize polyubiqutin - like promoter)、embryo - preferred 启动子 (maize globulin 1 )和 endosperm - preferred 启动子（maize 22k^, alpha - zein)。其 中，用含embryo - preferred启动子的表达栽体可获得最高的表达水平，产最约达 种子总可溶性蛋白的4%。从80g玉米粉中可提取4.3mg带甜味的f(组Brazzein。 美国Nek丨ai■公司利用转基因玉米生产Brazzein,估计从U玉米中可提取1kg甜蛋 白，国内也有转Brazzein基因瓜果的研究报道。
(三）通过复配来改善嗦吗甜的甜味特性
最优条件主要考察反应酶浓度、反应时间和混合物含水量对反戍的影响。 ?-胰凝乳蛋I1丨酶浓度从3% ~20% (w/w)等不同浓度对反应产率的影响见图 2-63。如图所示，反应产宇随酶浓度的增加而不断上升，在15%浓度时产率达 到53% (mol/mol),此后，随酶浓度的增加，反应产率上升幅度趋于平缓。图2 -62 N-苄氧羰荩-L-天冬氨酸二乙酯和D-内氨酰胺组成的二元体系的熔点 +没有加水，含有12%的水作为轜佐剂 +混合钧中含水摄15%酶浓度(w/h>V%图2 -63 ?-胰凝乳蛋卩1酶浓度对A’ -苄氧羰基-L -天 冬氨酸乙酯-D-丙氨酰胺产率的影响 +混介物中含水*15%,反应8h由图2-64可知，反应产率随着反应时间的增加而增加，反应约8h后达到 最大产率53%。随着反应的进行，反应物的减少和产物的产生改变了反应混合 物的低熔点特性，使反应混合物逐渐固化。最后，反应由于反应混合物的固化太 严重而几乎停止。S 2 -64 反应时间对N -苄氧羰基-L -天冬氨酸 乙酿-D-丙氨酰胺在低熔点混合物中产率的影响 注：其中/V-苄氧簾基-L-天冬软酸二乙酯和D-丙氨酰胺分别加人0.5mmol,混合物中含水S 15% (?/?), 胰凝乳蛋A酶浓度为丨5% (?/?>?
