开江县索马甜
(1)嗜热菌蛋白酶（Thmnolysin)丨sowa等人发现一种金属蛋白酶——嗜 热菌蛋1^1酶（EC3. 4.24.4)，可以催化侧链羧酸不带保护基团的Z - Asp和 PheOMe,合成阿斯巴甜前体A'’ -苄氧羰基-L -天冬氨酰-L -苯丙氨酸甲酯 (Z-ASp-PheOMe),见式（2-18〉。在所有关于酶法合成阿斯巴甜前体的报道 中，均采用嗜热菌蛋白酶催化。
同时具有甜味和苦味的简单分子数目不多。如果这些分子确在味受体两端极 化，两个尾端产生两种味，那么出现这种现象宥两种可能：
纽甜和脱酯化纽甜可以通过机体的正常代谢很快从血浆中淸除（图2 - 51 >, 然后迅速且完全通过粪便和尿液排出体外，在体内没有积蓄。纽甜和脱酯化纽甜 在血浆中的半衰期大约分别是0.5h和2h，人和大多数动物在口服一个剂董的纽 甜之后，它们的血浆浓度高峰大约分別出现在0.5h和丨h以内。纽甜和脱酯化纽 甜在人体内的血浆浓度随剂蛩的增加而成比例地增髙（图2 -52)。
2NHSO,H ? H2N—^^ + Ca (OH), ~?
高效甜味剂的优点，集中体现在：①化学性质稳定，耐热、酸和碱，不易出现分解失效现象，故使用范围比 较广泛。②不参与机体代谢。多数高效甜味剂经口摄入后原原本本地排出体外，不 提供能量，适合糖浓病人、肥胖症人和老年人等特殊营养消费群使用。③甜度较高，-?般都在蔗糖甜度的50倍以上。④价格便宜，等甜度条件下的价格均低于蔗糖。⑤不是U腔微生物的合适作用底物，不会引起牙府龋变。
Boeslen等催化还原N -苄氧羰基-L - a -天冬氣肤-L -苯内氨酸-丨-甲 酯和3，3-二甲基丁醛制备纽甜。将一定摄的苄氧羰基-L-a-天冬氨 酰-L-苯丙氨酸-1 -甲酯和3，3-二甲基丁醛加人到甲醇与甲基异丁基甲酮 (甲醇含量为45% ~90%质量比）的混合溶剂中，同时加人2%?丨0%的碳钯催 化剂，先通氮气一段时间再通氢气反应，反应温度26~65t,常压下反应，反 应持续1?20h。反应结朿通人氮气终止反应。过滤去除催化剂，滤液中加入足 量的水，在旋转蒸发器上减压共沸蒸发去除有机溶剂甲醉和甲基异丁基平酮，蒸 发温度为25~7(TC,过高会有副产物的产生，过低则不容易去除有机溶剂。然 后冷却到40尤以下结晶得到目标产物纽甜，可以用冷水冲洗或重结晶制取更卨 纯度的纽甜，晶体在80T以下减压干燥。干燥温度高于80T可能会导致纽甜的分 解或副产物的形成。整个反应过程，副反应少，产率高（>95%)。类似的还有用 /V -甲酸签_ L _a _天冬氣醜-L-苯丙氣酸_ 1 _甲醋、N-甲基-L -a -天冬 氨酰-L-苯丙氨酸-1 -甲酯、苄基-L-a-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-1 -甲 酯、/V-对苯基径氧基碳基-L-cr-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-1 -甲酯等进行纽甜 制备。
图6 - 20不具甜味的杂环化合物
天然仙茅蛋白的相对分子质最经低角度激光散射测定为27800，单体的相对 分子质最12491，经分析推断天然仙茅蛋白是两个相同肽链通过二硫键构成的二 聚体。经测定，仙茅蛋白含丨丨4个氨基酸，其中天冬氨酸、亮氨酸、甘氨酸的含 贵较高，没有检测到糖组分，说明仙茅蛋白不是一种糖蛋白。仙茅蛋白的氨基酸 序列见表5 -20。仙茅蛋白及其和麦芽糖结合蛋白构成的融合蛋白都能在大肠杆 菌中表达，但具体情况还未见报道。
表3-19给出了这两种三氣蔗糖衍生物的AH、B、X距离。对于两种三氣 蔗糖衍生物（少=75。，少= 95。），如果以2-OH (AHS) /3 - O (Bs)为AH/B 对，甜味分子的0-2…0-3…Cl-f距离并不满足AH、B、X甜味三角理论 (AH…B= ~0.30nm' AH …X=0.35nm、B…X =0. 74nm)。其中果聚糖衍生物 AH、B、X 的距离分别为 AH …B = 0,285nm、AH …X = 0. 687nm、B ??? X =
0.3g/L0以重组酵母GS115/PPIC9M/PPIC3.5kV为出发菌株，通过摇瓶水平发酵 条件优化，高甜度莫奈林的分泌表达量进一步由0.3g/L提髙到了 0.5g/L。在 30L发酵罐上采取分批补料的方式实现了重组酵母GS115/pP丨C9M/PPIC3. 5kV的 高密度发酵，高甜度萸奈林分泌表达量达2g/L。而且表达的髙甜度萸奈林分泌 到胞外，无需破碎细胞提取。诙方法提供了一条产量高、分离纯化简便、可低成 本大规模生产高甜度英奈林的新途径，为实现髙甜度莫奈林的产业化和vgb基因 在毕赤酵母髙密度发酵中的广泛应用萸定了基础。
