花山区糖精钠
C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶（GAP)基 因，其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 GAP基㈥克隆至6.5kh ￡co/U片段。起始密码子上游的Ikb片段（-976? -1，推断+丨为翻译起始位点）作为启动子，用引物在V端加上N?d位点， 在3'端加上Xbal和BamHI位点。终止密码子下游0.7kb片段（+ 1006? + 1728)作为终止子，用引物在V端加上BamHI位点，在V端加上Pst丨位点， 将两片段在pBluescript SK的No丨丨和Pst丨位点间连接，构建得质粒pGAPPTIO (图5 - 15)。含单链莫奈林的0RF的0. 3kb的Dral - Bgl D片段插至pGAPPTIO 的平头Xbal位点和BamHI位点之间构建得PGAPM3。含rDNA片段的表达质 粒如下构建：从pCLRE2 (图5-14)中分离得到的含部分rDNA的1.2kb Apal 片段插至pBluescript SK的Apal位点构建得质粒pCRAl。在pCRAl的Xhol切 割平头端连接上Sphl连接体构建得pCRA2，在pCRAl的Asp7丨8切割平头端 连接上Notl连接体构建得pCRA3。pCRA3的1.2kh rDNA切割为0.5kb和 0. 7kh Notl - Bgl n片段后连接到质粒pUCBgl的Bgl n位点，构建得质粒 pCRA10o其中质粒pUCBgl由pUC19经EcoRI和HindHI酶切，并在Klenow酶 切处理后在切点处连接Bgl D连接体构建得到。质粒pCRA2经Sphl和EcoRI 酶切后，与由PCLRE16分离得到的含CYH抗性基因的1. Ikl, Sphl - KcoRI片 段连接构述得pCLR216。质粒pCRAlO经Xhol和Ps丨I酶切后，与含CYH抗性 基因的丨.1比？311-5&丨1片段（-184?+974)连接，构建得到pCRALll。从 PGAPM3分离得到的含莫奈林表达盒的2. Okb Notl - PstI片段插至pCLR216的 Notl和PstI位点构逑的质粒PCLRM216 (图5 - 16),插至pCRALl 1的Not丨和 PstI位点间构建得到质粒pKMll (图5-16)。C. W/is的URA3基因经与 的ura3突变子减基互补克隆得到，用作整合目标。URA3的801bP ORF 的 区域（+4?+356)和 3'区域（+356 ~+685)分別为 SaH-Bgin 和Bgl丨丨-AsP718片段，这两个片段插至pUC19的Sail和AsP718构建得质粒 pURAl0在pURAl的Hindffl酶切端和Asp718酶切平头端加上Not丨连接体分 别构建得到pURA2和PURA3。从pURA2的5,端分离得Noll - Bgl H片段，从 PURA3的1端分离得BglD - Notl片段，两片段连接至质粒pUCBg丨的Bgin位 点构建pURAlO。含CYH抗性基因的1. lkb PstI - Sail片段插至pURAlO的Sail 和PstI位点间，构建得pURALl 1。含莫奈林表达盒得2. Okb的Notl - PstI片段 插至pURALll的1^11和？8|丨位点间构建质粒pUMll (图5-16)。
(三）三氣蔗糖的AH、B、X生甜团的分子识别
该转糖苷反应中，底物KU浓度及反应时间对转化率的影响见表4-13、图4-20。RU浓度较低时，RU-F合成速率较高，RU的转化率（RU-F/RU)在 反应初期达到最大。RU浓度0.025nu)l/L时，反应lh,达到最大转化率88%。 RU的转化率随RU浓度上升而下降，RU浓度0.5mol/L时，反应20h,转化率 为19%。S、RU的结果类似。S浓度0.025mol/L时，反应0.5h后转化率达 到 80%。
(二）阿力甜的稳定性图2-59对不同pH缓冲液中阿力甜和阿斯巴甜的半衰期作了比较。显然，阿 力甜分子比阿斯巴甜分子稳定得多。在酸性环境中（PH2?4)，阿力甜溶液的半衰 期差不多是阿斯巴甜的两倍。随着pH的增大，阿力甜的稳定性急剧增大，例如在 中性环境（PH5~8)中非常稳定，室温下可1C存1年以上不发生任何变化。pH图2 -59 在23弋、不同pH条件下阿力甜和阿斯巴甜稳定性的比较
但是，这并不等于人们只能坐等这些机遇的到米。相反.在对甜味化合物的 大量研究中发现，几乎每?种甜味分子的有机结构中都有可以被修饰而改善其件能 或指标的甜味分子结构。从这个意义上说，甜味剂分子是可以经过设计和修饰进而 合成新型人T.甜味剂的。然而，这项工作只有依赖于完善而明确的理论体系才能成 功实现，这也正是AH、B、X甜味三角理论在食品工业中的现实意义所在。
分离得到的L41蛋白的第56位氨基酸为脯氨酸，它是CYH敏感型蛋白，将 该位的氨基酸密码子突变为谷氨酰胺密码子即可得到CYH抗性基因作为标记 基因。
三氣蔗糖在水溶液中有2种可能的降解途径。在低pH条件下，三氣蔗糖会缓 慢地水解成其组成单糖的衍生物，水解速度随和温度而定。在高pH条件下, 它会在碱催化下从1和6’位置上消去氣化氢分子而形成3'，6^-酐。图3-5所示 为这二种可能的分解途径。当然在食品配料系统中，只可能出现酸催化分解现象。
