敖汉旗甘草甜素
(1)嗜热菌蛋白酶（Thmnolysin)丨sowa等人发现一种金属蛋白酶——嗜 热菌蛋1^1酶（EC3. 4.24.4)，可以催化侧链羧酸不带保护基团的Z - Asp和 PheOMe,合成阿斯巴甜前体A'’ -苄氧羰基-L -天冬氨酰-L -苯丙氨酸甲酯 (Z-ASp-PheOMe),见式（2-18〉。在所有关于酶法合成阿斯巴甜前体的报道 中，均采用嗜热菌蛋白酶催化。
理论上，lmol蔗糖生成lmol TRISPA，要消耗3mol三苯基氣甲烷和5mo丨乙 酸酐。为了促使反应向正向进行完全，添加稍微过量的三苯基氣甲烷和乙酸酐。 影响该反应的主要因素有以下4个方面^三苯甲基化反应温度和反应时间与乙酰 化反应温度和反应时间，此4个因素各选4个水平见表3-4。
图3-19 4-PAS浓度对 6-PAS得率的影响
③使大B链片段Glul - Gly41和另外一个B链片段Pro42-Trp72片段反应， 生成全长B链；
2-36所示，纽甜可以很方便地通过还原烷基化反应，由阿斯巴甜和 3, 3-二甲基丁醛制得。它是在钯（Pd/C)或铂（Pt/C)氢化催化剂的存在下， 用氢气处理阿斯巴甜和3, 3-二甲基丁醛的甲醇溶液来进行的。可以制得它的 无水化合物，但通常得到的都是单水合物，含4.5%结合水，经验分子式 ? H20，相对分子质谊3%.480图2-35 纽甜的化学结构^cho^apm-^ntm W2-36 通过3, 3-二甲基丁醛还原Af-烷基化制得纽甜
⑤脱乙酰化作用，恢复剩余的羟基团，得到终产品三氯蔗糖c
尽管Neoculin的总体结构和甘露醉结合植物凝集素的十分相似（见图
此外，AH、B、X甜味理论的应用也有助于人们对“相对甜味值”的更好 理解。“相对甜味值”的突出优点是，它将所有甜味物质的全部甜味特性和一种 标准甜味物质（通常是蔗糖）联系起来，并用一个具体的数值来表示，从而大 大简化了对各种甜味剂的联系和比较。但值得注意的是，由于一个甜味剂的所有 味觉属性被简单地组合成一个单独的“相对甜味值”来表示，也造成了其甜味 本质与“相对甜味值”之间存在一定的差异。
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
来自巴拉圭和巴西的研究报逍，大多提到甜叶菊提取物对血糖水平有影响。 例如，1966年Miguel报道说巴西糖尿病人每天摄人甜叶菊提取物800mg，未发 现任何副作用，且病人感觉良好，虽然其病情继续发展。1975年，Oviedo—份 来自巴拉圭的报道提到25个健康、无糖尿病的人摄取甜叶菊水提取物或提取物 的干燥结晶后，血糖水平有下降现象。但这些报道并不能得出某种结论，因为试
