昆都仑区低聚半乳糖
(三）三氣蔗糖的AH、B、X生甜团的分子识别
1975 ~ 1978年间，明石和光桥发表了数篇论文报道了这方面的研究情况。 他们以2.5g/kg剂最的甜菊苷喂养小鼠1个月，以5g/kg剂量的较纯提取物（含 甜菊苷40% -55%)喂养小鼠5个月，均没发现任何毒性反应。
罗汉果中的甜味成分为三萜类糖苷Mogroside IV和V，化学结构如图4 -37所 示。其中以Mogmside V为主，属极性化合物，含有5个葡萄糖残基，在干燥果实 中的含量为1%。Mogroside V的分子SCmH,? 2H20,相对分子质量1322, 易溶于水，对热性质稳定，在沸水中保持5h未出现明显的分解现象，干燥条件 下加热至丨97?201X：可分解。以0.02%蔗糖液为对比物的分析结果表明，Mo- groside V的甜度是蔗糖的256倍，但其甜味延绵，带來类似甘茶甜素或甜菊苷的 苦后味。制备时，可用水或50%乙醉从干罗汉果中抽提，再经浓缩干燥而成， 外观呈无色粉末状。
关于嗦吗甜在各种含水香味溶剂.(如乙醇、异丙醇、甘油和丙二醇等）中 的溶解性情况，前面已讨论过。试验表明，这些溶剂对嗦吗甜的甜味特性及风味 增效特性影响很大。例如将嗦吗甜的乙醇溶液（含乙醇60%)置于3CTC下贮藏 1周后，取出相当于2mg嗦吗甜的溶液冲稀释至lOOmL,就感觉不到甜味。而这 一浓度的嗦吗甜溶液的甜度通常都是很高的，相当于4% 的蔗糖液的甜度。 虽然贮藏后的溶液并没发生浑浊或沉淀现象，但需添加为通常数萤10倍的嗦吗 甜才会感觉到甜味，这说明大约有90%的甜味已经丧失。然而，！h以后重新品 尝这种溶液时发现甜味竟然完全恢复了。进一步的研究发现，时间对这种现象的 发生关系很大（图5-2)。
转化菌株TB2bl -44中已含有B2作启动子的表达盒，再经质粒pG丨)71 (该 质粒含有gdhA启动子和潮霉素抗性基因作标记基因的表达盒）转化得到双转化 体（double transfonrnin丨），从中选择产率较高的双转化体TB2bl - 44 - GD4、 -GD5、-GD6、-GD7在MDFA优化培养基摇瓶培养后达到最高的表达水平
有别于其他C族G蛋A偶联受体的是，甜味受体为异型二聚体。一些研究 人员猜测，TIRs (特别是T1R3)很有可能就是甜味受体，并且可能像其他C族 G蛋白偶联受体一样形成同型二聚体。但是，几个月后，Li等便证明了只有异型 二聚体T1H2 -T1R3才具有甜味受体的功能。T1R3的序列有20%与mGluRs的 相同。在人们发现甜味受体的时期，mGluR8是惟一一种结构已被人们至少部分 了解了的C族G蛋白偶联受体。正是人们对mGluRlN端结构的了解，促成了首 个甜味受体同源模型的建立。类似于mGhiRl，这个模型为两条T1R3链的同型 二聚体。不久后，—个类似的模型表明，T1R3的活性位点可以容纳三个甜度极 高的小分子质量分子。
0.1 -0. 4mol/L NaH2P04 (或 MES 或 Bis Tris propane)缓冲溶液中，在 pH5. 5 - 8.0、温度22~40弋的条件下反应2?48h。反应体系中的溶剂、pH、缓冲溶液 的浓度和反应温度都会影响酶的活性，但对酶的选择性的影响比较小。反应过程 中乙腈等有机溶剂的比重不能超过50%，如果超过，溶剂体系会使酶发生改性 而降低水解率。反应温度的升髙会加快反应速率，但会使反应的选择性有所降 低，反应最佳温度应控制在22-40T。
有人曾用酶法和化学法合成过蔗糖，也用类似的方法合成过自然界不存在的 L-蔗糖（图1-2)。然而令人惊奇的是，L-蔗糖与自然界天然存在的D-蔗糖 一样甜。L-蔗糖与D-庶糖在立体化学上呈镜像关系，是由L-果糖和L-葡萄 糖缩合而成。重要的是，L-果糖和L-葡萄糖-样也是甜的。由于L-糖不参 与人体代谢，W此令人很感兴趣，只要经济上合算，就可作为新型功能性甜味剂 加以开发。
Winnig等对识别lacUsole的分子基础进行了更为深入的完善。通过对特定受 体突变体的功能分析，他们发现小鼠WR3的第五个TM呎域的突变V738A足以 使小鼠甜味受体获得lactisole敏感件，尽管这一受体突变体的敏感性要比人体甜 味受体的低。另外，通过小鼠T1R3的突变K735F，可得到一个与人体受体具有 相同丨actisole敏感性的小鼠甜味受体。所有以前的资料均表明，甜味受体的 T1R3原体的TM K域中有真正的第四个部位。图1 -34描述了受体T1R2-T1R3 上的四个结合部位。
