金堂县阿力甜
曾尝试在大肠杆菌中表达重组奇异果素。在表达载体中插人以化学法合成的 奇异果素基因，所得的载体即转化成大肠杆菌菌株HB101。尽管通过SDS - PAGE和Western印迹分析可检测到重组奇异果素的存在，但是，所得的通组奇 异果素并不具味道修饰作用。在酵母和转基因烟草中的尝试结果也一样，尽管都 成功地表达出了重组奇异果素，但是产物也不具备甜味诱导活性。
Gapdh. A：./oc山的3-碥酸甘油醛脱氡酶启动子： a -amy, 的淀粉HKj 动子；
提取甘草甜素时，先将甘草切细后加5倍质量的冷水浸泡2d后过滤。往滤 渣中加3倍质量的水冷浸12h，再次过滤。合并两次滤液，经蒸发浓缩并冷却 后，加乙醇在低温下放置2d后过滤，滤液蒸发浓缩后得黑褐色黏稠状抽提液。 抽提液中的甘草甜素含量为15%，干燥失重为35%以下。甘草抽提液再次浓缩 干燥后，制得粗结晶，然后在稀乙醇溶液中重结晶制得甘草甜素终产品。
(1)以环己胺和氨基磺酸钠为原料
图3-15三苯基化与乙酰基化的反应式
果素。首先，导入重组奇异果素基因，构建重组奇异果素的表达质粒，并在表达 质粒中插人KEX2切割位点；然后，将表达质粒导人如orrzoe，获得30 个产重组奇异果素的转化株。选择产量最高的菌株进行大规模培养，培养时间为 3d。Western印迹分析确定了培养基表面有重组奇异果岽的存在。结果还显示， 在非还原条件下，60ku处有一条宽带，301O1处仅有一条校糊的带；而在还原条 件下，60ku处的带消失，30ku处的带却变宽。这些结果与两个30ku单体在非还 原条件下形成60ku的二聚体的事实相符。重组奇异果素的产量估计为2mg/L培 养基，纯化重组奇异果素的产S娃0.8mg/L培养基，所得的单体重组奇异果素 和二聚体重组奇异果素的分子要比天然奇异果素的大。对N42、186Q突变体的 N端糖基化位点的分析结果清楚地表明，这是由于所得糖蛋白的糖链部分质里有 所不同而造成的。
除了对二氢氧氮水环二氧化物环上不同取代产物进行研究外，人们还合成r 结构类似的化合物以观察环上的变化对其甜味的影响悄况，但没发现其他任何新
①先将L-Asp的氨基或羧基保护起来，其中保护氨基的还需再转变成 L-ASp酸酐，或是保护氨基与生成酸酐两步同时进行。②L - Phe 酯化成 L - PheOMe0③使已保护基团的L-Asp与L-PheOMe缩合生成带保护基的a-Asp- PheOMe (无甜味），同时还有少量-异构体等副产物生成。④脱除保护基生成有甜味的a - Asp - PheOMe (阿斯巴鉗）。⑤提纯和精制n
蔗糖甜度的提高定会使摄人最减少，这就降低了能摄的摄人虽，此外，衍生 物还能抑制转化酶或0C -葡萄糖酶的水解作用，这又进一步抑制了人体对它的代 谢作用。从上面结论可明显看出，要增加蔗糖的甜度，衍生化必须提高分子的亲 油性，特别是在轴向C-4及C-P位上，而C-2和C-3^[上需保持羟基游离 的状态，W为它们是生甜团三角形中的B和AH单元。
