乌海市索马甜
通过薄层色谱（TLC)光密度法分析测定，可知中国甘草根中甘草酸的含量 为3. 11% ~6.53% ,俄罗斯甘草为2.2%，阿富汗甘草为5.11% ^用气相色谱 (GLC)分析同样的产品时，可以发现TLC的甘草甜含量分析结果是GLC分析结 果的3/4。
在有机合成化学中，乙酰基的接上与脱除是一个成熟的反应，得率高，操作
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
注：?系从天然物中提取出的紫杉叶素（TaxIfoirO鼠乍糖作衍生物。
PKU是一种先天性遗传疾病。患者由于先天性缺乏苯丙氨酸羟化酶，导致 持续性的羟化酶活性不足，从而引起苯丙氨酸代谢障碍，使得大量的苯丙氨酸及 苯丙酮酸累积在血液和脑脊髄液中，引起一系列的神经系统损害。PUK是新生 儿筛查领域最经典的病种。从近几年各地新生儿筛查统计来看，我国PUK发病 率为1/17000?1/6000,全国每年有1500?2000名患儿出生，发病率呈现北方髙 于南方的趋势。由于体内苯丙氨酸代谢障碍，苯丙氨酸无法氧化成酪氨酸，并抑 制产生黑色素的酪氨酸酶，因此患儿的症状主要表现为头发泛黄，质地细软，缺 乏光泽，尿液常带有令人不愉快的鼠尿味，此外易合并湿疹、呕吐和腹泻等。出 生时正常的患儿一般在3 ~4个月后会出现不同程度的智力低下，易激动、烦躁 或抑郁，如果不及时治疗最终造成中度至极重度智力低下，会给家庭和社会带来 沉重负担。
发现比较晚的Brazzein由于具有耐热性，而且甜味高，因而有望大规模生 产。美国Kelcakr Worldwide公司已经可以利用含有Brazzein基因的玉米生产 Brazzein,据称丨I重组玉米中可以提取1 kg的Brazzein,但迄今为止还没有这方面 的确切报道。
分离提纯过程，主要根据嗦吗甜的水不溶性及电荷特性进行。阁5-4所示 为从酵母中分离提纯嗦吗甜的流程图，得率达80%，纯度>95%。在该流程后， 还可以冉进行SDS凝胶电泳或在离子交换层析后，在lOOmmol/L醋酸中进行 SP-SphadexG-75凝胶过滤，去除少萤杂蛋白。提纯结果表明，转化酵母中的 嗦吗甜约占不溶性蛋白质的20% (或总蛋白质的10% )。
(四）固相合成法生产莫奈林
苯酐先与氨水和氢氧化钠进行酰胺化反应，之后在碱性条件下与次氣酸钠进 行霍夫曼降级反砬制得邻氨基苯甲酸，邻氨基苯甲酸与亚硝酸钠在酸性条件下进 行重氮反应，接着与二硫化钠进行罝换反应得到邻二硫二苯甲酸，邻二硫二苯甲 酸与甲醇酯化反应后再被液氣氯化，其后与苯酐法相同，进行胺化、酸析和中和 反应，生成糖精钠。 ?
