息县甘露醇
Goodman等人提出一种“后向旋转” 二肽酰胺的甜味模型，他们用NMR法 对丙氨酸酰胺（D-型[86]有甜味，L-型没有甜味）及其相应的“后向旋 转”酰胺（R-型[94]有甜味，S-型[95]有甜味）进行研究。假设肽键是 反式的且两性离子天冬氨酰基团的形状近似为一个平面，结合：①偶联常数 [J (VH」H>];②核极化效应；③温度对NH化学位移的影响这三方面的因 素，分析这些化合物的立体构象。通过计算所需的能量最低值，表明只有一种低 能量构象符合NMR的分析结果。图2 -84描绘了带有阿斯巴甜的甜味结合模型, 其中阿斯巴甜的构象与它在晶体结构中存在的构象很接近。阁2 - 84 连有阿斯巴甜分子的甜味结合模助 注：箭头所指的键由品体结构軔箭头方向旋转140%
(二} Brazzein的甜味特性
在非选择性培养基上培养转化细胞，在起始培养时各转化体的莫奈林表
实验中对24h后积累在反应混合体系中的还原糖数量进行了测定。挤压膨胀 淀粉体系中只有0.34g/L，与液化淀粉的7.84g/L相比很小，环糊精葡糖基转移 梅催化挤压膨胀淀粉表面的非还原性端，因此还原糖代表的低聚麦芽糖的最较 小，因此甜菊苷转葡糖基得率较高。
表3 -n 蔗糖卤代脱氣衍生物的相对甜度
阁2 - 22 在40T水/有机溶剂二相体系合成Z - Asp - PheOMe的时间-得率图 注：ffl中上方为Z - Asp - PheOMe在有机相的得牟；下方为在水相的得率。反应物为80_l/l. PhcOMc ? HCIX 80mmol/LZ-A?p、酶浓度0.053mmol/Lu參、▲、,、▲表示实聆蛄果；曲线为埂论結果。
1982年，有人最早从Capparis masaikai Levi (当地称为马槟榔）的种子中提 取得到甜蛋白——马槟榔。这种植物生长在中国昆明的亚热带地区，果实有乒 乓球大小，成熟种子用于中药，有甜味，当地人经常食用。马槟榔甜蛋白能引起 持久甜味，相对分子质量11700，等电点pHU.8，在280nm波长有最大吸收峰， 其引起甜味感觉的最低浓度为0. 1%，种仁含甜蛋白量约4%。
要增加蔗糖的甜度就必须提高分子的亲油性，特别是在轴向4-C及r-c 位上，而2-C和3'-C滞保持羟基游离的状态，因为它们是甜味三角形理论中 的AH和B单元。如按单基团取代比较，蔗糖分子中各羟基的相对活性可大体排 列为：6,>6>4>r>2>3, 3\ 4'但这仅是个原则，羟基被活化而形成活化 级络合过程中还会受到空间阻碍作用，有些羟基在与较大基团作用时会因空间排 列阻碍而受抑制，从而失去应有的活性。例如，4位仲羟基虽比1,伯羟基活泼， 但在酯化反应中各羟基反应的活泼次序是.6-OH，6,-OH>r-OH>2-OHt 且在与像三苯基氣甲烷这样大的取代基团反应时，却是r位的伯羟基优先活化。 通过对氣代产物分离和鉴定，可知蔗糖分子立体选择性反应的反应活性顺序是： 6, - OH >6 - OH >4 - OH > 1, - OH >4, - OH。1, - OH 的氣化速度之所以缓慢， 是因为它是受阻的新戊基型的初级羟基，且毗连于a-异头物基团上。
目前已有多种含巯基试剂如氧化型谷胱甘肽和胱氨酸用于蛋白质折黉复性， 其中采用胱氨酸比用氧化型谷胱甘肽成本低。将含巯基化合物胱氨酸合成蛋白 质-巯基半胱胺化合物阻隔游离的蛋白质巯基，这样可以有两个好处：变性蛋A 的水溶性敁著提高；只有加人弱还原剂后巯基才能进行相互交换。用还原型胱胺 化合物从变性蛋白质生产天然嗦吗甜的折叠过程如图5-5所示，最终得率提高 至约5pg/mL (25%),可以用品尝试验测定。酵母嗦吗甜A、B折垒复性的得率 较低，酵母嗦吗甜I不能折奋成天然（甜味）构型。酵母嗦吗甜的N端氨基酸 (一内氨酸）虽被乙酰基阻隔，但经-?系列试验证明这种修饰对蛋白质折替及甜味 没有影响。这些结果表明：嗦吗甜丨和A的另一个不同的氨基酸即第113位的 氨基酸可能不是天冬酰胺而是天（门）冬氨酸。
各质粒的启动子分别是：zlcre/no/iium chrysogenum的B2广谱醋酶基因 (cesB )的后动子(pBKThb )、PeniciUium chrysogenum的异青毎素合成酶 (pcbC)启动子（pCKThb)、Aaimmon的谷氨酸脱氢酶基因（gdhA)后动子 (pGDTli)和/的3 -磷酸甘油醛脱氢酶基因（gpdA)启动子 (pGPTh)。各质粒$至经ble标记选择得到的/l.a?;amon>/66菌株，该菌株没有 曲霉蛋白酶 A (aspergillopepsin A, PepA)活性。
