濉溪县结晶果糖
莫奈林娃从D. cumminsii的浆果果肉中提取出的甜味蛋白一般用水法抽提， 抽提液经离心分离、超滤浓缩后用离子交换色谱法提纯楮制，再经超滤脱盐后冷 冻干燥。起初，1kg浆果只能获得100?150mg的莫奈林，现在的提取得率已提 髙至3~5g。大批量处理时，可使用分批吸附法。先将水抽提液与分散在 0.02nu,l/L醋酸铵缓冲液（PH5.0)的吸附剂CM - Sephadex C25淤浆混合，接 着用水反复冲洗淤浆达到纯化的目的，然后用0.02mol/L NaCl溶液将吸附在 Sephadex上的莫奈林洗脱下来，超滤浓缩后冷冻干燥。这样分离得到的莫奈林， 若在离子交換色谱柱上分别用NaCl浓度呈梯度上升的PH7. 6和PH8. 2缓冲液进 行洗脱，还可进一步分级成5种纯组分，依次称为莫奈林I ~V,其中最主要的 是莫奈林IV。
甘草和甘草甜作为有多种用途的药用品和食用品，已有数百年历史。在现 代医药工业上，由于甘草具有可口的味感和很强的甜味，因此仍受奇睐。甘草 甜对治疗胃和十二指肠溃疡是有效的，但有关它的抗溃疡、抗发炎的作用机理 尚未弄淸楚。最近的研究表明，甘草及其衍生物能抑制致龋齿细菌在牙齿表面 粘附而具有抗龋齿的特性。甘草甜素被美同食品与药物管理局列人“公认的 安全物质”名单中，其甜度比蔗糖甜50 ~ 100倍。甘草甜可口的味觉及在水溶 液中形成稳定的凝胶特性，更增加了它为抗龋齿剂的实用性。甘草有毒的副作 用是由于它具有类似矿物类皮质激素的活性。摄人甘草甜含量髙的糖果和药品 可导致血钾过少症、高血压及其他矿物类皮质激素副作用等病症。尽管如此， 它良好的医疗特性和抗龋齿特性正吸引着人们对它进行更深入的研究。
从植物中分离得到的Brazzein有几种结构，其中主要构型中的末端氨基酸 是焦谷氨酸（pGlu)[围5-24 (1)]0另一构型除末端没有该氨基酸外，其 余均相同，称为de8-pGlul -Brazzein [图5-24 (2)]t它的甜度是主要构型 的Brazzein的2依。按des - pGlul - Brazzein的氣基酸序列采用大肠杆菌优选 密码子合成的基因如图5-24 (3)所示。合成的Bra^ein基因若直接克隆至 质粒 pET-3a、pET-9a、pET - 1 la 和 pET - 16b 得到的 Brazzein 表达水平均 很低，只有pET-3a和pET-9a得到少量可溶的Brazzein。pET载体通常能使 外源可溶性蛋白如葡萄球菌核酸酶表达，葡萄球菌核酸酶与Brazzein的显著不 同是葡萄球菌核酸酶的氨基酸数目>100，且没有半胱氨酸或半胱氨酸含S很 低。若采用两种基因融合生产目的蛋白融合体的表达水平较髙，因此将 Brazzein合成基因插人葡萄球菌核酸酶表达系统。该策略经大肠杆菌生产鸟类 卵黏蛋白区证实很成功。
甜菊作浓j?/(g/L>
(2)
4，二氣半乳糖基蔗糖的甜度是蔗糖的120倍。首先用三苯甲基保护蔗 糖的三个第一类羟基和用醋酸盐保护第二类羟基，然后用沸水乙酸对蔗糖三苯甲 基衍生物进行脱三苯甲基作用，除去第一类保护基团并使c-4上的醋酸基团迁 移至C-6，制得4、r和6’-位未被保护的蔗糖5-醋酸盐。在嘧啶中用苯甲酰 氣对蔗糖5-醋酸盐有选择的苯甲酰化，得到6 -安息香酸盐，用磺酰氣和氣化 锂氯化，并脱去保护基团，得到4，厂-二氣半乳糖基蔗糖，见图3-60。
另一个U：验操作是，将50gTRlSPA溶于150mL 二氣甲烷中，加人丨5mL甲 醇和12.5mL浓盐酸，在宰温下搅拌溶液4.5h，用树脂中和盐酸。在真空状态下 于室温蒸去二氣中烷和部分甲醇。加人丨20mL甲醇溶解浓缩物，搅拌30min后 再加6mL水，继续搅拌lOmin。过滤出27. 5g三苯基甲醇沉淀，滤液真空浓缩成 油状物，再加入80mL乙酸乙酯共沸以蒸去剩余水分。将油状物真空十燥过夜, 可得到26g产品。经产品分析，产物熔点为143?150^,与理论值相差较大, 说明产物中含有较多杂质，得率估计在70% ~80%之间。
5-27),但是在两个亚基的C端尾部却都存在显著的结构差异。植物凝集素的C 端区域伸展至另一条亚基上，而在Neoculin中，NAS和NBS的C端区域均卷曲 成环，并由亚基间二硫键固定。C端区域的这种构象导致了亚基-亚基相互作用 程度的降低以及NAS和NBS中B11和B12间的新环（L11-12)的形成。Tan- credi等曾研究大分子甜味剂中是否存在可探测受体活性部位的“甜味指” (sweet fingers)。研究人员通过研究Neoculin的结构发现，Neoculin中并不存在可 能的“甜味指”，这和Tancredi等人的研究结果一模拟小分子质里甜味剂构象 而设想的“甜味指针”并不一致。
三、甜菊苷的生产技术甜菊苷例商业化生产大多采用从甜叶菊中提取提取物后经精制而成。美国加 利福尼亚州的Dynapol实验室从事合成研究证明，合成物比提取物的甜味特性更 好。但合成法成本太高，目前难以形成商业化生产规模。
将甜菊苷、可溶淀粉和浸麻芽孢杆菌MaciUus maccrans)的环糊精葡栅基 转移酶前后分别在40弋、281乙酸盐缓冲液中保持8h和10h,然后分离得到多 种转葡糖基组分（结构见图4-5),经分析知：主要转匍糖基产物中1 -la和 1 -lb是单葡糖基转化产物，1 -2a、1 -2b和1 -2c是双葡糖基转化产物， 1 -3a, l-3b、1-3c和1 -3d是三葡糖基转化产物，四葡糖基转化物的得率非 常低。
