姚安县安赛蜜
Sun等人成功地在转基因莴苣中获得了重组奇异果索，首次从外源宿主获得 具有生物活性形式的奇异果素。编码奇异果素的cDNA是用R duUifica果肉中的 所有RNA合成的，并被克隆于植物表达载休——PBI121或pBE2113-GUS。载 体pBI121和pBE2113-GUS都含有CaMV35S启动子、胭脂碱合成酶（nos)启 动子和终止子。此外，PBE2113-GUS载体中还含有带翻译增强子（E12-35S- H)的启动子盒。所有这些都被引人A 菌株GV2260。通过感染带载
三脱氧-半乳糖基-蔗糖（Sucralose,参见本章第一节）是最甜的蔗糖衍生 物，比蔗糖甜600?650倍。由于Sucralose具有甜味纯正、安全无毒等特性，对 抗酸水解的稳定性比蔗糖大60倍，因此英国Tate & Tyle公司选择了它作为一种 髙效新型的甜味剂加以开发，现已实现产业化规模。
上述大部分试验是在20世纪60 ~ 70年代进行的。1985 ~ 1986年间，荷兰 TNO - CIVO毒理与营养学研究所对新橙皮苷二氢查耳酮重新进行了一次彻底的 亚慢性（13周）小鼠毒理实验。在该研究中，雄、雌性Wistar小鼠每20只为一 组，在91d的喂养期间，新橙皮苷二氢查耳酮D的添加剂量分别为0%、0.2%、 1.0%和5.0%。结果只在5%剂萤组出现一些变化，诸如出现着边（炎症初期 时，白细胞黏着于血管壁）、体重与饲料采食萤发生变化，盲肠增大，以及临床 化学参数发生轻微变化等。这些现象的出现，说明化合物n只表现出很轻微的毐 性作用。其余的剂量组，未发现任何异常。所有剂量组在动物眼科、血液学和组 织病理学方面，未出现任何异常。这个试验表明，对中等剂量组，换算成每天每 千克体重的剂量是750mg，是安全的。根据这个以及上述早期的试验结果，欧共 体食品科学委员会于1987年承认新橙皮苷二氢查耳酮的食用安全性，并提出其 最大的ADI值为5mg/kg。对于大多数的食品用途来说，这个ADI值是足够的。
初步的毒理试验和长期的食用历史，可以证明罗汉果所含的Mogrosides是安 全的，加上其良好的风味、稳定性、水溶性以及价格便宜等优点，Mogrosides及 罗汉果浸出液作为一种潜在的甜味剂有很广阔的应用前眾，值得大力开发C
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
其罝换过程可简单表示为：
甜菊苷可用于口香糖和泡泡糖及用于制造有各种风味，如番木瓜、菠萝、番 石榴、苹果、橘子、葡萄或草莓风味的软糖。甜菊苷还可与山梨糖醇、甘氨酸、 丙氨酸等混合用于蛋糕粉。因甜菊苷对热稳定，因此特別适合于这方面的用途。
表4 -24 M. vinacea的a -半乳糖苷酶催化甜叶悬钩子苷
