七星关区山梨糖醇
现在，人们正努力研究以期分离出能引起上述反应的专一微生物。已发现很 多细菌具有分-葡糖犴酸酶的活性，能将甘草甜素水解成甘草亭酸。只有两种细 菌可将3 -脱氧-18 -卢-甘草亭酸还原成甘草亭酸或3 -表-18 -甘草亭酸。 从人的新鲜粪便中分离出的瘤符球歯属(Riimirwcoccus)具有水解甘草甜素生成 18 -P -甘草亭酸的功能，另外可将3 -脱氢-18 -甘草亭酸还原成对映体 3-表-18-0-甘草亭酸的梭状芽孢杆菌(Clostridium)也是从人刚排出的粪便 中分离出来的。这两种细菌的混合体能将甘草亭酸异构成3 -表-18 -办-甘草 亭酸，反过来也如此。这一过程可能是通过氧化中间体3-脱氢-18-/3-甘草 亭酸而进行的。甘草甜素转化成3-表-18-分-甘草亭酸是分几步进行的，其 中的终端异构物（isomer)是几种细菌的?种产物。所有变化可概括成：甘草甜
(一）不同卤素取代基对甜度的影响卤素取代基大小及其电负性大小，对蔗糖衍生物甜度具有明显影响。4, r, 6,-三溴蔗糖衍生物的甜度是蔗糖的800倍，而4，\\ 4\ 6-四溴蔗糖衍生物 的甜度为蔗糖的7500倍，显然溴取代基的尺寸能使甜味分子更好地结合到味莆 受体上。电负性较强的氟取代基和尺寸较大的碘取代基都不能如此大幅度地增强 甜味，如4, 6,-三氟蔗糖衍生物的甜度大约是蔗糖的40倍，而4, r, 6'-三碘蔗糖衍生物大约比食糖甜120倍，而相应的氣代蔗糖衍生物和溴代蔗栅 衍生物的甜度分别为蔗糖的600倍和800倍，说明溴代蔗糖衍生物和氣代蔗糖衍 生物具有最合适的分子大小和电负性。
其他还有许多国家和地诸如澳大利亚、加拿大、徳国、新西兰、西班 牙、比利时、墨西哥、以色列、西非、丹麦、瑞士以及其他一些欧洲国家均已批 准使用，可用于食品、饮料、医药品及化妆品上作甜味剂或风味增强剂。无疑， 嗦吗甜是一种很有发展前途的性质优良的天然食品添加剂。
应6h，密封保存，此溶液直接用于下步反应。反应方程式为：
第六章L.A；?；.含成钳.味刑
(二）结合小分子甜味剂的活性位点
+NH2S0,Na ?QH.jNHSOjNa + NH3 t
Brazzein在植物甜蛋白中分子质虽最小，分子质萤约为6473u, p/为5。它 具有良好的水溶性，在水中的溶解度在50mg/mL以上，甜度是等质虽蔗糖的 2000倍。其结构相对简单并具有良好的热稳定性和PH稳定性，在较宽的1^和 温度范围内保持稳定，在80T保持4h甜度没有减弱，在85弋仍保持折叠形式, 在髙pH的溶液中仍保持甜味活性。它良好的热稳定性也许应归因于分子内的4 个二硫键。由于这些特性使其在食品添加剂中具有巨大的应用潜力，并成为研究 甜味蛋白分子结构、生化特性及甜味机制的理想蛋白模型。
图4-10比较了两个酶反应体系中可用简单的离心方法分离的残留淀粉量。 由于挤汛膨胀淀粉以悬浮状态存在反应混合体系中，因此大多数残留淀粉经离心 (3000g, lOmin)得到分离，而传统体系中残留液化淀粉很难分离。
果素。首先，导入重组奇异果素基因，构建重组奇异果素的表达质粒，并在表达 质粒中插人KEX2切割位点；然后，将表达质粒导人如orrzoe，获得30 个产重组奇异果素的转化株。选择产量最高的菌株进行大规模培养，培养时间为 3d。Western印迹分析确定了培养基表面有重组奇异果岽的存在。结果还显示， 在非还原条件下，60ku处有一条宽带，301O1处仅有一条校糊的带；而在还原条 件下，60ku处的带消失，30ku处的带却变宽。这些结果与两个30ku单体在非还 原条件下形成60ku的二聚体的事实相符。重组奇异果素的产量估计为2mg/L培 养基，纯化重组奇异果素的产S娃0.8mg/L培养基，所得的单体重组奇异果素 和二聚体重组奇异果素的分子要比天然奇异果素的大。对N42、186Q突变体的 N端糖基化位点的分析结果清楚地表明，这是由于所得糖蛋白的糖链部分质里有 所不同而造成的。
