长武县蔗糖素
Gapdh. A：./oc山的3-碥酸甘油醛脱氡酶启动子： a -amy, 的淀粉HKj 动子；
采用固定化酶牛.产，可以实现连续操作和酶的重复利用，且酶更稳定。但如 果在水溶液中反应，产物沉淀在多孔载体或外部溶液中，收获闲难，因而不可 行。Oyania和Nakanishi等在有机溶剂中用固定化嗜热菌蛋白酶连续催化反应, 由于Z-AsP - PheOMe可溶解在有机溶剂如乙酸乙酯中，因此就避免了上述 闲难D
1 t 甜菊醉糖苷^~一甜菊双糖E苷 甜菊双糖D苷
图1 -27所示为浓度的增加对开始作用时间（~)、持久性时间和反 应的主观强度（S/)的总体影响情况。主观强度曲线上达到平衡稳定时间时，所即与离子载体激发历程（the ionophor triggering mechanism)或与受体的快速平衡 结合，假如以表示受体分子，尺.表示受体一底物复合物的离解常数，[SQ]为 非专一性结合区（假定是不变的）外口水中停留的糖分子浓度，[SJ为非专一 性结合区内口水中的糖分子浓度，r为被激活的离子载体的比例（例如为 [SR] / [Ra\),并假定r与品尝人员的主观反应（S/0 (例如甜味觉的主观强 度SI)有关。在味觉上升阶段，S/?可通过下式计算：
由于奇异果素的糖蛋白在果实中的含萤很低，它本身对温度和pH的变化又 很敏感，这就给分离与提纯带来很大的困难。早期报道的提取工艺由于残留有蛋 白酶活性，所以得率很低。其他方法则要求使用复杂的溶剂系统以及精细的纯化 步骤，即使这样，每吨浆果最多只可提纯出200mg左右的奇异果素。较大规模 提取时，lkg浆果通常只能获得50mg的产品。奇异果素本身对热及pH很敏感, 在低于PH3或高于PH12的室温环境下会失去活性。然而l(XVg的奇异果素就足 够提供持续延绵的增甜效果。实际应用时，1kg的浆果可提供数倍重虽蔗糖的 甜味。
从Fischer■提出的甜二肽分子模型中，可清楚地看出甜味在立体化学上的要 求。然而，等价但更紧密的结构01仍有意义。Goodman和Gilon提出一个相似的 典型例子是L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸（及D-丙氨酸）酯。
果素。首先，导入重组奇异果素基因，构建重组奇异果素的表达质粒，并在表达 质粒中插人KEX2切割位点；然后，将表达质粒导人如orrzoe，获得30 个产重组奇异果素的转化株。选择产量最高的菌株进行大规模培养，培养时间为 3d。Western印迹分析确定了培养基表面有重组奇异果岽的存在。结果还显示， 在非还原条件下，60ku处有一条宽带，301O1处仅有一条校糊的带；而在还原条 件下，60ku处的带消失，30ku处的带却变宽。这些结果与两个30ku单体在非还 原条件下形成60ku的二聚体的事实相符。重组奇异果素的产量估计为2mg/L培 养基，纯化重组奇异果素的产S娃0.8mg/L培养基，所得的单体重组奇异果素 和二聚体重组奇异果素的分子要比天然奇异果素的大。对N42、186Q突变体的 N端糖基化位点的分析结果清楚地表明，这是由于所得糖蛋白的糖链部分质里有 所不同而造成的。
他们通过CLUSPRO wel> server获得了奇异果素的四聚体模型。二聚体的定 位方式总结起来有两种：--种形成球形四聚体结构；另一种形成线形四聚体结 构，两种定位方式都与可以兼容糖链的存在。两种四聚体模型在组氨酸的位置、 组氨酸的外露情况和带电表面这些方面的性质都与单独的二聚体的一致，糖链并 不会引起位阻现象。在球形结构中，两二聚体之间会形成4个H键，并且每个 亚基都有46个残基位于分界面。而在线形结构中，两二聚体之间仅存在1个H 键，位于分界面的残基数儿乎为球状结构中的一半。球形和线形结构可能就分别 代表奇异果素四聚体的“合”和“开”两种形式。
给试验动物的膳食中添加的纽甜浓度超过0.05%?3. 50%的范围时，食物的 可口性就会降低，从而导致动物拒绝进食或食后溢出，这与所给的动物每千克体 重的纽甜剂量无关，而与膳食中纽甜的浓度有关。例如在13周的试验中，因为 随着动物体重的增加，膳食中纽甜的浓度要不断增加以维持试验要求的以千克体 重为基础的剂萤，所以当纽甜在睛食中的浓度从50g/kg (膳食的5%)降到 35g/kg (膳食的3.5%)时，狗实际上消耗了更多的纽甜。用纽甜对年幼大鼠 (1~13周）所进行的1年或2年的试验，没有发现与纽甜有关的食物消耗或食 物转换效率的改变，因为生长期的年幼动物当其生长的生理需要战胜了可口性差 的膳食时，它就会“饥不择食”。
1.对AH、B基团的扩展最早Shallenberger对甜味基本单元AH、B的定义是：A和B是空间相距 0.25~0.40nm带相反电荷的两个原子，其中A含有一个带正电的质子，B为质 子受体。但在诸如三乙酸或三硝酸甘油酯等一些甜味分子中，却找不到如此定义 的氢键供体AH，因此主张引申Shallenbergei的AH、B为Lewis酸碱概念中的A 和B:即凡是能接受未共用电子对形成共价键的分子或离子都称为Lewis酸；凡 是能给出未共用电子对的分子或离+都称为Lewis械0
