田阳县爱德万甜
糖楮 溏挤钠 糖W钙
Vilsmeiei?试剂作为氣化试剂，反应温度必须髙于95T以使不活泼的V位发 生充分氣化反应，但反应温度过髙，反应时间过长，容易造成6-PAS分解或炭 化。我们对其氣化反应的温度和时间进行了系统研究，结果如图3-24所示，在 I15T下反应4h，TOSPA得率可达72. 3%。
(一）嗦吗甜基因的合成
为确定变性酵母嗦吗甜能否在体外折奋成甜味构型，先对已被还原的变性植 物嗦吗甜进行折叠复性预备试验。植物嗦吗甜分子中有8个二硫键（图5-1), 因此稳定性很好，但同时也使其还原和复性都很闲难。Ellman’s试剂[5, 5# - dilhiohis - (2 - nitrobenzoic acid)]的二硫键还原过验证实了植物味吗甜的二硫 键对还原作用很稳定：2个稳定的二硫键需在37弋、PH9、8moI/L尿素中经 50mm?l/L (3 -巯基乙醉作用2h才能完全被还原。
植物嗦吗甜，经过SP-Sephadex离子交换层析及酸性屎素凝胶电泳后，完 全分离。提纯得到的两种主要的蛋白质，由TPCK修饰的羧甲基胰蛋白酶降解为 肽段（TPCK降低了胰凝乳蛋白酶活性），再经Cl8柱逆向HPLC分离，收集洗脱 液并测定氨基酸组成及序列后，根据已知嗦吗甜的一级结构（依据相似性）迸 行排序。比较后发现，这两种嗦吗甜中只有在46位上的氨基酸不同（分别为天 冬酰胺和赖氨酸），但它们均与已报道的嗦吗甜I和n序列不同，新序列分别用 嗦吗甜A、B表示。嗦吗甜A有1个或4个、嗦吗甜B有2个或3个氨基酸与嗦 吗甜I或II不同（表5-7)。
总的说来，具有高效甜味的二肽化合物在分子结构上不仅必须具有符合一定 距离的两性离子，能增强其甜味的疏水基团（X)还葙要处于生甜团（AH-B) 附近的合适位置。而具有甜味的二肽化合物在水溶液中的构象一般呈现L-型或 延展型。此外，二肽分子三维模型中的D区域处若能被某一基团填满，或者二 肽化合物带有的两个芳香环相互靠近，产生较强的分子内作用，都能显著提高二 肽分子的甜度。
在二相体系合成Z - Asp - PheOMe的反应平衡的理论关系可按照Martinelc和 Semeno提出的类似方法推导。在推导过程假定在有机相中的底物和缩合产物都 是非离子形态，且在有机相中Z-Asp-PheOMe、PheOMe之间不形成复合物， 带离子型羧酸侧链和非离子型C端的Z - Asp组分忽略不计。二相体系的反应平 衡常数计算式如F:
图4 - 10采用不同糖基供体进行甜菊苷转糖苷反应后，可经离心分离的 淀粉世及残留还原糖量比较 表示-O—和一醫一的A线重叠；
液。降温至0T，约15min向瓶内滴加4.20mL (0. 055mol)双乙烯酮，继续反
糖精经历了最严峻的20世纪70年代。现在，人们对塘精的指责有所减少 了，对糖精的压力已缓和了不少。人们似乎又重新确认了糖精的食品甜味剂地 位，美国、英闰、欧盟等〗00多个同家仍继续使用，世界食品添加剂联合专家委 员会也同意继续使用。
