剑川县安赛蜜
马槟榔蛋白II及其同工蛋白（I、1-1、ID和IV)的cDNAs都已克隆并测序 了。马槟榔iv的c端比in少4个氨基酸，因此它可由马槟榔in得到。马槟榔n 的前体由155个氨基酸残基组成，其中包括信号序列的20个氨基酸、N端延伸 肽的15个氨基酸、A、B链之间连接肽的14个氨基酸残基和C端延伸区的1个 氨基酸残基。序列分析表明n刚形成时两条链中插入了 14个氨基酸组成的连接 序列形成单链，然后在蛋白质成熟过程该连接序列被切除。也有通过载体 pET - 15b已将马槟榔的基因转人大肠杆菌中表达。
要使表达系统的表达水平较髙，则必须选择一强启动子。以Escherkhia coli lacZ为报告基因，发现C. ulULs的GAP启动子比C. utilis的PGK启动子的 效率高几倍。W此用的部分GAP基因（TDH3 )作为探针从
S-6-a从溶液中螯合除去，S-6-a的得率并未增加，这可能是因为S-6-a 与树脂的结合不够紧密；而通过在反应体系中加人葡萄糖氧化酶来除去葡萄糖副 产物以使反应正向进行，S-6-a的得率也未增加。
上述大部分试验是在20世纪60 ~ 70年代进行的。1985 ~ 1986年间，荷兰 TNO - CIVO毒理与营养学研究所对新橙皮苷二氢查耳酮重新进行了一次彻底的 亚慢性（13周）小鼠毒理实验。在该研究中，雄、雌性Wistar小鼠每20只为一 组，在91d的喂养期间，新橙皮苷二氢查耳酮D的添加剂量分别为0%、0.2%、 1.0%和5.0%。结果只在5%剂萤组出现一些变化，诸如出现着边（炎症初期 时，白细胞黏着于血管壁）、体重与饲料采食萤发生变化，盲肠增大，以及临床 化学参数发生轻微变化等。这些现象的出现，说明化合物n只表现出很轻微的毐 性作用。其余的剂量组，未发现任何异常。所有剂量组在动物眼科、血液学和组 织病理学方面，未出现任何异常。这个试验表明，对中等剂量组，换算成每天每 千克体重的剂量是750mg，是安全的。根据这个以及上述早期的试验结果，欧共 体食品科学委员会于1987年承认新橙皮苷二氢查耳酮的食用安全性，并提出其 最大的ADI值为5mg/kg。对于大多数的食品用途来说，这个ADI值是足够的。
②不是食物的天然成分，或多或少存在着食用安全性方面的疑问，让人无 法放心大胆地使用。即使是经严格毒理试验证实安全无毒的产品，终究会因是人 工合成品而给予人一种“不安全”感觉。
常用来除去三苯甲基保护基的试剂有：80%乙酸（回流温度）、HC1/ CHC13、HBr/乙酸（在0弋）。在酸性条件下的糖苻键，温度越髙、时间越长 就越容易断裂。在Ot、冰醋酸和浓盐酸的作用下，脱去三苯甲基还原成
对未经标记的二氢查耳酮丨和n的研究发现，它们的代谢情况与其他类黄酮 一样，在很大程度上是由于肠道微生物群的作用而引起的。其中一个艰要途径是 其取代的间苯三酚a环及相邻的羧基发生分解作用，产生一系列c;-c6酸，并 与B环脱开。代谢产物包括：
随后，许多卤化蔗糖衍生物被合成成功。r-氣蔗糖的甜度是蔗糖的20倍， 在二甲基甲酰胺中，用二甲氣基二苯硅烷处理，蔗糖c-r和c-2位首先被阻 碍，得到丨\ 2-二苯基亚甲硅基蔗糖衍生物，产量约为20%左右。.将剩余的6 个羟基团乙酰化后，用沸水乙酸把亚甲硅基断裂除去。在嘧啶中用三苯甲基氣化 物可对剩下的第一类羟基进行三苯甲基化作用，并且使剩余的第二类羟基乙酰 化，得到r-三苯甲基-蔗糖-7-醋酸盐。在冰醋酸中用溴化氢进行脱三苯甲 基作用，然后在嘧啶中用磺酰氣氯化，再在二甲基中酰胺中用氣化锂处理，最 后，在甲醇中用甲醇钠脱脂化得到r-氯庶糖。
(二）莫奈林的甜味活性中心
