望江县低聚木糖
早在100多年以前，人们就知道对位乙氧基苯脲具有甜味，甜度是蔗糖的200 倍。该化合物在美同曾一度允许使用，后由于发现有诱变性及毒性而被禁止俾用。
也可以通过烟草表达莫奈林。首先合成了由噬菡体PI Cre重组酶介导的特异 ?组位点丨OXP的序列，构建了两个loxP同向重复的棺物表达栽体pGLX121. 1。 PCR定点突变了 CaMV 35S启动子元件中kozak序列，使kozak中的翻译起始密码 子ATG位于Ncol位点上。把spm基因克隆到表达载体pG〖MA的Ncol和PstI之 间，给甜蛋白8pm基因加上35S启动子和polyA及NOS终止子元件，然后克隆到 PGLX121. 1的EcoRI位点上，用农杆菌LBA4404转化烟草，获得卡那痗素抗性转 基因植株，经过PCR及southern分析，证明甜蛋白spm基因已整合到烟荩基因组 内。用转基因烟草的总RNA通过RT-PCR反转录扩增spm基因，证明了在35S启 动子及其他调控元件的控制下，spm基因在转基W烟草中转录表达出mRNA。提取 转基因烟草总蛋白，经SDS-PAGE分析，初步证明了 8pm基因在转基因烟草中表 达出目的甜蛋白。
该表达系统以产朊假丝酵母(CandUla utihs)为莫奈林基因的宿主细胞，采 用的GAP启动子，对的核糖体蛋甶L41基W进行体外突变得到 的放线菌酮Uycloheximide, CYH)抗性基因作为标记基因，质粒构建后再线性 化，以多拷W整合至宿主染色体进行表达。
影响反应的主要因素婼Vilsmeier试剂和S - 6 - a的摩尔比、S - 6 - a浓度、 反应时间与反应温度，以上4个因素各取3个水平，如表3-6所示。
阁2-丨2在不同pH下温度对阿斯巴甜 图2-13在25弋时pH与阿斯巴甜
CaMV, 35SRNA 的 Cauliflower Mosaic vims 启动子。
(-)S-6-a合成反应条件的优化
在饱和乙酸乙酯缓冲液中，由嗜热菌蛋白酶催化合成Z-Asp-PheOMe的反 应动力学可表示为 Z-Asp (ZA)、PheOMe (PM)、Z - Asp - PheOMe ( ZAPM) 的快速平衡机理，满足Michaelis-Memen动力学，其中Z - A叩对酶活力部位的 双侧均有亲和力，PheOMe除进行酶促反应外，同时还以?级反应速率进行非酶 促分解。ZAPM、ZA和PM浓度变化引起的结果如式（2-19)-式（2-21) 所示
Vilsmeier试剂是一种较好的氣化试剂，其优点表现在制备容易和选择性较 好，它可安全有效地氯化蔗糖分子4、r和6#位，理论得率可达80%以上。 Vilsmeieri^剂是由无机酸氣化物与化学式为R2NCOX的W，W - 二烷基胺（如二 甲基中酰胺、二乙基乙酰胺）反应制得，其中X代表氢原子或甲基，R代表烷 基。通常使用的无机酸氣化物有五氣化磷、光气和氣化亚砜等。Vilsmeier试剂可 以直接在氣化反应体系中生成，但最好在使用前预先制备。
