金乡县甘草甜素
对不同内阻下场强对转化率和活细胞的影响作了研究（图5 -18)。细胞悬 浮液与1叫经Bgi fl酶切的pCLRE2混合后在电容25jjlF下进行电脉冲转化，电 脉冲后，细胞在30T添加了 lmol/L山梨糖醇的YPD培养基上培养6h。在场强 为3.75kV/cun和内阻80W1时得到最高的转化率，约为1400个转化体/jxg线性 pCLRE2。在3. 75和5. 0kV/cm和内阻6(X)、800或100011时转化率较高[图 5-18 (1)]0这些条件下细胞存活率为10%?40%，实际脉冲时间为11 ~ 17ms [图5-18 (2)]。当内阻200或400ft时，转化率低。
图3-丨3 -氣蔗糖仝基团保护合成法的主要步骤 T. 三苯甲基 AcO——乙醃基
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
图2-76烯炫型[110]和后向旋转酜肢型fill]的甜二肽化合物
浓度/( g/100m Lflm')
Sarroch Theerasilp等用Edrmm自动降解法对奇异果素的整个氨基酸序列进行 了测定。发现奇异果素氨基酸序列与其他甜蛋白序列没有明显的相似性，但与大 豆胰蛋白酶抑制剂A和C的氨基酸序列的相同比率分别为36.3% (从奇异果素 的氨基酸末端至60位氨基酸）、51.5% (奇异果素的143位至羧基末端）。这两 种蛋白均是分子质貴约为20000^的植物蛋白。
本法只需以葡萄糖和蔗糖为前体，但要通过发酵产生G-6-a，这是一个昂 贵的过程，因为它需要杀菌操作及分离除去G-6-a中的葡萄糖,：此外，虽然 果糖转移酶反应可以在髙底物浓度下迸行并获得较高得率的S -6 - a,但分离提 纯S-6-a则是困难的，因为所有试图结晶出S-6-a的努力都不成功，它只能 通过色谱分离得以纯化。
用Abbe折射仪测出三氣蔗糖的折射率，如阁3-3所示。由于它的折射率与 浓度成很好的线性关系，因此可用折射率法精确快速地测定出三氣蔗糖在水溶液 或食品中的浓度图3-3只氣蔗糖水溶液的折射
甜菊苷可用于口香糖和泡泡糖及用于制造有各种风味，如番木瓜、菠萝、番 石榴、苹果、橘子、葡萄或草莓风味的软糖。甜菊苷还可与山梨糖醇、甘氨酸、 丙氨酸等混合用于蛋糕粉。因甜菊苷对热稳定，因此特別适合于这方面的用途。
图2 -82 阿斯巴甜分子中天冬氨酰残基与苯丙氨酸残基的参趋构象示意图2-83 阿斯巴甜匕口丨和？…丨构象的分子模型 AH-B-X的最佳距离（0.1nm)
