莱阳市山梨糖醇
本研究用二甲基甲酰胺（DMF)和氣化亚砜制备Vilsmeier试剂，此反应为 放热反应。将8.4mLDMF预冷至0T，加入8.5mL氣化亚砜，搅拌反应30min， 温度控制在50弋以下。反应结束后加人lOOmL DMF，将混合液冷却至Ot,在 20T：以下缓慢加入15g6-PAS (Vilsmeiei?试剂：6-PAS =4:1),在0弋下保持 15min0慢慢升温至70T,通人氮气来赶走部分HC1，此温度下维持30min后再 逐渐升温至100?12(rC，恒温反应3~5h,趁热以活性炭脱色，浓缩滤液，冷却 后有晶体析出。待结晶完全后过滤，用无水乙醉重结晶，得到白色针状晶体，为 4，丨\ 6'-三氣-4,丨\ 6、三脱氧-2, 3, 6，3\ V-五乙酸半乳蔗糖醋 (TOSPA)。
其中1997年，Kirin Co. ( Kanagawa,日本）的Kondo K等人的研究成果最为 引人注目。他们将人工合成的莫奈林基因克隆至产阮假丝酵母(CandUia utilis)细 胞内进行表达，莫奈林表达水平达到细胞可溶性蛋A的50%，莫奈林得率达 10mg/g湿酵母，该得率与从植物提取的最大得率相当，并且所得的莫奈林分离 纯化工艺非常简单，所用的C._7i5又是食用性酵母，因此采用该方法将能实现 英奈林的商业化生产，从而大大推进兑奈林的商业化开发进程。这里对该研究做 一介绍。
其中，[ZAUPMk和[ZAPMU是非离子型Z - ASp、PheOMe和 Z-Asp-PheOMe浓度；是底物和产物间的平衡常数，其中末端、侧链竣基 及末端氨基都足非离子形态，且带离子型羧基侧链的Z - Asp和带非离子型C端 的Z-Asp含量都忽略不计。
注：本表系水滚液中的测定教据，括号内教振系蔗糖与二氬查耳《等甜度时的浓度比值.即二氮金卑 明的相对甜度。
ra 6 -19 各种不同取代基团的二氧硫氮杂环二氧化物及其钠盐的甜度 注：下标数字表示对蔗糖甜度的俏数.对照物是4%的蔗嬤液,
图2-24中，实线和虚线分别表示了不同a值和底物浓度的组合时，G、 与pH的关系。在计算时，因P?2。值很小故用0.02计，因此水的分配对得率 的影响可以忽略不计。图中只幽了 a =丨，Z - Asp和PheOMe = 80mmol/L时的 Yaqy其他情况下Z-ASp-PheOMe在水相的得率很小。由图可知，达到最大平 衡得率时水相pH约为5,比在水溶液合成达到最大得率时的pH低。当《增大 时，则反应物的非离子形态增加，从而L增大。PheOMe和Z - Asp浓度增加都 能使L增大，但增加PheOMe浓度还提髙了合成速率因而效果更好。当pH在
在我国，有人先后选用了毕赤酵母系统中的分泌型表达载体pPIC 9K及胞内 表达载体PP1C3.5K进行莫奈林表达，结果是，分泌型表达菌株能较高地表达莫 奈林，但没有甜味活性，而胞内表达的英奈林有活性，其产最达到1.8g/L。
通过研究发现核糖体L41蛋白中的第56位氨基酸决定了酵母对CYH的敏感 性或抗性。56位氨基酸为谷氨酰胺时该蛋白为抗性蛋白，56位氨基酸是脯氨酸 时为敏感型蛋由。这也在CYH抗性酵母Candida mallosa、Kluyveromyces lactis和 Schwanninomyces cerevisiae 的 L41 蛋白得到了证实。对于 CYH 敏感型 Saccharomy- ces cerevisiae^将其L41蛋白第56位氨基酸的密码子用谷氨酰胺的密码子替换后， 细胞就具冇了 CYH抗性。
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Xu等人利用人体和小鼠TIRs基因之间的嵌合体来绘制T1K2 -T1R3中的 结合部位。当人体受体的T1R2的N端域被相应的小鼠序列所取代时，其对 阿斯巴甜和纽甜的反应则消失，这表明，人体受体的T1R2的N端区域是识别 阿斯巴甜和纽甜的必要部位。但是，研究人员却惊奇地发现，T1R3的C端TM 区域是识别甜蜜素及甜味抑制剂lactisole所必需的。当研究人员用相应的小鼠 序列替代人体T1R2的N端或C端部分时，发现这对甜蜜素的反应沖没受影 响，但是当与T1R2共同表达时，人体T1R3的TM区域却是识別甜蜜素的充 分条件。与在甜蜜素实验所观察到的相似地是，lwtisole这一人体特异性的甜 味抑制剂，需要人体T1R3 C端区域的存在，才可以抑制受体对典型甜味兴奋 剂的反应。
