汉南区低聚半乳糖
本节主要介绍采用嗜热繭蛋酶催化合成阿斯巴甜前体的研究。(2)内肽酶(Endopeptidas) 可将W -苯甲酰-L -天冬氨酸-a -甲酯与 L -苯丙氨酸甲酯缩合生成带苯甲酰基的a - Asp - Phe0Meo(3)木瓜蛋白酶在乙酸乙酯溶液中将苄氧羰基-L-天冬氨酸与苯丙氨酸 中酯缩合生成带苄氧羰基的阿斯巴甜。木瓜蛋内酶甚至可用外消旋的D, L-苯 丙氨酸甲酯起反应，而只生成L-型产物。(4)嗜热脂肪芽孢杆菌(BaciUus stearothermophUwO的中性蛋白酶可将苄 氧羰基-L-天冬氨酸与苯丙氨酸甲酯盐酸化合物缩合生成带保护基的阿斯 巴甜。(5)金黄色葡萄球菌(^taPhylococc似aurcwO的蛋白酶可用不带保护基的 L -天冬氨酸-? -甲醋或a -酸氣与L -苯丙氨酸甲酯缩合生成阿斯巴甜。
第五章高效甜蛋白
表3 -18 三氮蔗糖及其衍生物与受体蛋白的作用部位
目前，研究人员已完成了对马槟榔n的初级晶体学分析，而对马槟榔n结构 测定工作仍在进行当中。研究表明，马槟榔n由两条多肽链（a链和b链）非 共价紧密地连接在一起，各链氨基酸数目分别是33、72，甜度是等质量蔗糖的 100倍。A链的大多数氨基酸为疏水性氨基酸，B链中也含有很多疏水氨基酸。 两条链中Glu和/或Gin和Arg数量较多，且两条链均不含Ser、Thr、Tyr、Met 和Lys。马槟榔II含有8个半胱氨酸，但没有发现游离巯基，因此马槟榔II虽分 子相对较小，但可能形成了4个二硫键，其高度的热稳定性可能归因于此。比较 发现马槟榔II和嗦吗甜I、莫奈林、Curculin和奇异果素的氨基酸序列没有明显 的相似性，但它和arabidopsis thaliama 2S种子储藏蛋白，尤其是2S A蛋白AT2S 间的序列有很髙的相似性，而后者没有甜味。2S白蛋白AT2S3和A链4 ~20位 氨基酸中70. 6%匹配，和B链7 ~69位氨基酸有52.4%匹配，并且这两种蛋白 的8个半腕氣酸的位置相同。不同植物如/4. fAa/iana、Brassica napus s Ricinus communis和Bert— excelsa的2S白蛋白的序列髙度相似，因此可以认为马槟 榔II是具有甜味的2S白蛋白。的2S白蛋白的小亚基（A链）的某 些序列和嗦吗甜相似，但2S白蛋白的这部分序列与马槟榔n没有相似性。
其中，[ZAUPMk和[ZAPMU是非离子型Z - ASp、PheOMe和 Z-Asp-PheOMe浓度；是底物和产物间的平衡常数，其中末端、侧链竣基 及末端氨基都足非离子形态，且带离子型羧基侧链的Z - Asp和带非离子型C端 的Z-Asp含量都忽略不计。
安赛密的甜度与对照物蔗糖液的浓度有关，大约是3%蔗糖液甜度的200 倍。随着蔗糖液浓度的增大，其相对甜度逐渐下降（图6-23)。通常，人们认 为安赛蜜的甜度大约是糖铕钠的一半，比甜蜜素钠甜4?5倍，在相同浓度下， 对比于中性溶液，在酸性食品或饮料中会感到更甜些。
如图2-75所示，一种称为“后向旋转”（rHminvereo)的肽改性法，是将 酰胺结构中通常的羰基和含氮基团颠倒过來。在现有条件下，是连接于内二酸衍 生物上已被酰化的1，1 - 二氨基烷烃来代替通常的酰胺键连基团。D-丙氨酰胺 经后向旋转后得到的化合物，其甜度可增至900倍（表2-51)。2, 2, 5, 5- 四甲基环戊基化合物[94]的甜度很大，而2, 2, 4，4 -四甲基-丨hietane [96]的甜度要弱一些。1, 1 - 二氨基烷烃部分的R或S立体异构体[94]与 [95],它们的甜度相似，但是，经二甲基化后的化合物[97]，其甜度只有 [94]的一半。对于小基闭（如平基）来说，只要立体化学上允许就可进行双取 代。这对于以低成本的外消旋丨，1-二氨基烷烃来制备这些甜味化合物，具有重 要的实际意义。很显然，甜受体在接受“上面”基团时具有一定的灵活性。
对蔗糖和三氣蔗糖AH、B、X生甜团的分析发现，整个果糖基部分在充当 疏水部位X角色中的重要性，这些疏水部位既不是固定不动的，也不是一成不 变的，它甚至可以经过诱导作用扩展到呋喃果糖基之外的葡萄糖基单元上。如蔗 糖的两对AH、B双功能实体r-OH/2-O和3f-0H/2-0，前者连接三个Kier 的疏水部位于T -CH2、6 -012和& _CH2，后者连接两个这样的中心于 r-CH2|fl6-CH20
以嗦吗甜基因中322bp Ncol片段作为探针，与九awamori基因组中的单拷贝 gdhA基因杂交的694bPPvuII片段作对照，对转化体进行DNA印迹杂交分析以估 计各转化体中嗦吗甜表达盒的数最。分析表明，在各转化体的表达盒没有发生重 排，各拷贝数为5~14 (表5-9),表达盒的拷贝数与嗦吗甜产率有明显的相 关性。
