桃江县甜蜜素
Xu等人利用人体和小鼠TIRs基因之间的嵌合体来绘制T1K2 -T1R3中的 结合部位。当人体受体的T1R2的N端域被相应的小鼠序列所取代时，其对 阿斯巴甜和纽甜的反应则消失，这表明，人体受体的T1R2的N端区域是识别 阿斯巴甜和纽甜的必要部位。但是，研究人员却惊奇地发现，T1R3的C端TM 区域是识别甜蜜素及甜味抑制剂lactisole所必需的。当研究人员用相应的小鼠 序列替代人体T1R2的N端或C端部分时，发现这对甜蜜素的反应沖没受影 响，但是当与T1R2共同表达时，人体T1R3的TM区域却是识別甜蜜素的充 分条件。与在甜蜜素实验所观察到的相似地是，lwtisole这一人体特异性的甜 味抑制剂，需要人体T1R3 C端区域的存在，才可以抑制受体对典型甜味兴奋 剂的反应。
在软饮料pH范围内，三氣蔗糖是所有可供选择的强力甜味剂中性质最为稳 定的一种。含有TGS的产品货架寿命长，即使经过长时间的贮藏，产品也没有 甜味损失现象。用它配制饮料时，由它而产生的限制W素很少，用它可配制出比 用其他甜味剂pH要低很多的高品质软饮料来。此外，低pH的浓缩饮料（如用 来配制碳酸饮料的矿泶浓浆）也可成功地用7氣蔗糖来生产，而生产这种浓缩 液如用其他甜味剂替代.尚未见有成功的报道。
1991年，Timi和Nofre提出多点结合甜味理论。该理论认为，人体甜味蛋白 受体最少包含8个基本的识別部位，并与甜味分子上相应的结合部位发生相互作 用。这一理论也能用来解释AMP及其衍生物具有强力甜味的原因，如图2-89
acummimh娃攀缘植物，生长于潮湿阴暗的森林地带，在带有茸毛的挛生 蔓藤似长茎上长出心脏状的叶子。每年5月前后的雨水季节来临时，雌性植株即 会开花，之后结出-?簇簇类似葡萄状的红色浆果，每簇的浆果数在丨00个左右。 7 ~ 10月份为收获季节。剥去浆果相对较厍的外皮，藤出了灰白色的高甜度黏质 果肉，里面还有一个带刺的黑核。刚果（金）人冇食用这种浆果及其类似甘箬 的块茎的习惯。食用这种浆果需十分小心，因为其带刺的黑核一旦被咬破会释放 出很苦的物质——咖伦宾和异咖伦宾。但核里还含有丰富的十八碳五烯酸，约占 脂肪酸总量的84%，是一种潜在的珍贵植物油资源。叶中含有相当数量的生物 碱，有一定的药用价值。块茎和茎梗也有一定的药用价值。
冉排氨3.5h，得邻甲酰胺苯甲酸钠溶液 (简称酰胺化液〉。在酯化锅内将酰胺化 液降温后，加入冷冻的甲醇和次氣酸钠 溶液，在01下反应45min后升温至 30$，以淀粉碘化钾溶液测试呈无色反
Kubusoside的化学结构与甜菊苷十分相似，但其甜 度仅为蔗糖的1M倍，比甜菊苷低得多。此外，
虽然Vilsmeier试剂选择性很好，但由于反应温度和酸度高，控制不当舄炭 化和水解，而且反应过程中所产生的S02、HC1气体腐蚀性较大，需对其进行特 別处理。而使用三苯基膦_0(：14进行氣化，反应条件温和。具体方法是，将 6-PAS溶于吡淀后冷却至(TC,在OtT分别加入三苯基膦和CC14,逐步升温至 70^,恒温反应3h。加人甲醇终止反应，真空浓缩至干后加入丙酮，去除不洛 物后浓缩，最后加乙醚结晶，经过滤、重结晶得到浅黄晶体产物。三苯基膦与 6-PAS的摩尔比分别为7:1、6:1、5:1、4:1，与CC14的摩尔比均为2: 1，结果 如图3-25所示。从曲线趋向看，三苯基膦过量越多，越利于TOSPA生成，但 从经济角度出发，考虑到三苯基膦过貴所增加的生产成本，控制其配比为6:1， 此条件下得率为51.8%。图3-24反位温度和时间 对氣化得韦的影响图3-25三笨基膦与ca4摩尔比 对TOSPA得率的影响
X(% ) =? (l -JY] 100 (2-8)当底物浓度为0. lmol/L时，产物溶解度为0. lfim时，反应平衡得率也达 99.6%，几乎为定量反应。因此加保护基闭降低产物溶解度能够得到很高的平衡 得率，但保护基团必须能够很容易地从产物中脱去。表2 -5所示为几种最常用的保护基团及其稳定或脱去的一般条件。保护某 些肽的氨基的/V-苯乙酰基可用青霉素酰基转移酶（EC3.5. 1.11)催化
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
1 t 甜菊醉糖苷^~一甜菊双糖E苷 甜菊双糖D苷
