云溪区甜蜜素

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最近,研究人员还发现了一种NAS的同种异型物一NAS-2。仙茅蛋白2 的cDNA已克隆,其核苷酸序列也被测定。尽管,仙茅蛋白2的推测氨基酸序列 与NAS的相同,研究人员发现两者的核苷酸仍存在一个不同之处。Maiko Suzuki 等尝试了在£:.co/i中表达重组仙茅蛋白1 (过去被认为是Cimnilin)和仙茅蛋白 2。仙茅蛋白1和仙茅蛋白2分别在E. coli中表达,然后用氧化重折叠方法重新 组合,从而获得仙茅蛋白的二聚体。可是,无论是仙茅蛋白1的同型二聚体 (仙茅蛋白丨-1)还是CurcuUd的同型二聚体(仙茅蛋白2-2),都未能引起 甜味,也未能起味道修饰作用。
由于各甜蛋白间只存在一些三肽序列相同,且它们连接抗体后就丧失了 甜味或变味特性,W此另外一些研究人员猜测一些氨基酸拉伸后参与形成能 被味觉识别器识别的结构。根据报道,仙茅蛋白分別和莫奈林、奇异果素和 嗦吗甜有2个、5个和6个相同的三肽,但免疫印迹分析结果表明,仙茅蛋 白的抗血淸只与奇异果素发生微弱的反应,而与嗦吗甜、莫奈林不发生反 应。假定这些推测的三肽是在分子表面,则它们应存在于5个完全铩露在表 面的环中:11 ~丨4、46~51、66 ~ 70, 76 -78, 106 ~ 109 0这些氨基酸序 列明显与没有甜味和变味特性的GNA不同。特别是,属于11~14、46~51 和66 ~70的氨基酸非常接近(1.50~1.60mn),能够构建一个一般的抗原 决定子(common antigenic determinant),它能使味觉接收器失效。另外,多 肽链折叠后,仙茅蛋白的AsP71和Tyi65靠近并暴寐在表面,并且形成一个 类似于阿斯巴甜的味点。
(二)质粒构建
然而,鉴于两代白鼠试验发现了明显的膀胱癌变,似乎没有一个国家认为可 以无限里地使用,丹麦、荷兰等国家仍严格限制它的使用,世界食品添加剂联合 专家委员会也将原先同意的糖精AW值0?5mg/kg减少到0. 0-2. 5mg/kg,并取 消了有条件的0~15mg/kg。
奇异果产于热带非洲西部加纳、刚果等地,是山榄科(Sapotaceae)植物 Richardella dulcifica Baehni 所结的果实,这种植物以前常称为 Synsepalum dulcificum DC。该植物属于灌木,生长比较缓慢,种植之后要过3 ~4年才能长到2.0 ~ 4.5m的成熟高度,此时开始在分枝处开花结果。典型果实长2cm,呈鲜红色的 椭岡球状。果皮内侧有一层较薄的果肉,果肉包围着一个橄榄状的大核,奇异果 素就存在于果肉中。
许多甜菊苷生产流程均在后道的精制过程中使用f有机溶剂,诸如要去 除一些杂质可选用正丁醇及其醚或酯,有机氣化物或脂肪醇等。要使甜菊苷 结晶析出可选用甲醇或乙醇。结晶甜菊双糖苷A的较好溶剂为70%乙醉。 色谱分离可用多孔性凝胶或有机溶剂。要用色谱法分离出各种单一的双萜苷 可用烷基醇作溶剂。虽然色谱法精制分离效果很好,但还难于在商业化生产 中加以应用,在甜菊苷沉淀过程中,通常结合使用一些有机溶剂以去除色素 及一些杂质,最常见的沉淀剂是氢氣化钙。使用絮凝剂也可去除类似的 杂质。
果浆中的仙茅蛋白不能用水抽提,因此经反复水洗可去除大萤水溶性物质, 然后可以用O.5rnol/L NaCI提取,这样就能明显提高仙茅蛋白的纯化倍数。 0.5mOI/LNaCl提取的提取液无色有甜味,然后经硫酸铵分级,再经CM-Sepha- _柱分离,NaCI线性洗脱后主要成分对应一个尖峰,该峰组分有甜味。加硫 酸铵至约饱和度的80%,得到的沉淀在lOrmnol/L磷酸缓冲溶液中溶解,溶液进 行Sepha(丨exG-100柱凝胶过滤纯化。这样从30g果浆(湿取)可以得到5mg纯 仙茅蛋白(表5-19),得到仙茅蛋白纯度很高,不溶于去离子水,溶于盐溶液 中,等电点7.1。
对于阿斯巴甜(L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯)分子(图1-6),它的 甜味分子必须带冇酯键。游离的酸没有甜味,只有L、L构型才有甜味,D、D 型和L、D型异构体均无味。阿斯巴甜比蔗糖甜160 ~200倍,维持分子的主要 单元是L-天冬氨酰。虽然Shallenberger理论可解释已知的所有甜味化合物的甜 味特性,但仍有很多含AH、B单元的其他有机化合物没有甜味。所以,肯定还 有其他附加条件。

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