平南县蔗糖素
(六）酵母嗦吗甜的分泌表达
(三）邻甲基苯胺法
不同的Candida utilis菌株电脉冲转化的效率有较大不同。将Bgl D酶切后的 PCLRE2通过电穿孔转化至ATCC9256和ATCC9226，都能得到CYH抗性菌落， 多拷贝载体DNA也串联整合至rDNA区，但转化率都不到ATCC9950的10%。 整合至ATCC9256的pCLRE2拷贝数为6~8，整合至ATCC9226的拷贝数为 5-9,整合至ATCC9950的拷贝数为10?12。
(五）可接受的每日摄入ft与预测的每日摄入量比较
//>#转化株在MDFA培养基中，30T,摇瓶培养5d，分泌型嗦吗甜的生产 情况如图5-7所示。各转化体均产朱嗦吗甜，其中采用的gdhA启动
美国威斯藤丰大学校友会科研中心分别以0. 05%、0. 5%和5. 0%浓度的糖 精喂养雄、雌鼠各20只，其中F,代断奶后喂以代饲料持续100周。F,代从母体 怀孕期就开始接触糖精，之后哺乳、成长至终身均持续摄取糖精。在这组试验
当研究一类蛋白质的共同功能的起源时，研究人员一般都是通过比较序列 和/或三维结构来寻找这类蛋白质成员的对应部分。然而，人们至今仍未在莫奈 林、嗦吗甜、Brazzein、马槟榔、奇异果素和Curculin中发现序列同源性。通过 Clustal X得出的双序列比对结果表明，莫奈林和其他甜蛋白（嗦吗甜、Brazzein、 马槟榔、奇异果素和Curculin)的相同残基百分比为：莫奈林和奇异果素之间 23% ,莫奈林和Curculin之间仅为7%。如果把鸡蛋淸溶菌酶也考虑进去，那么， 所得的结果[图1-30 (1)]是这些蛋白质完全不存在对应性（mis-alignment): 仅有3个部位具有少许同源性。即使把序列比对仅局限在三种最甜的蛋白（莫 奈林、Brazzein、嗦吗甜>，也只能发现2个相同部位和12个具有同源性的部位 [图 1-30 (2)]。图1-30 甜味蛋白的序列比对 (I)典奈林、嗦叫甜、BraHein、4槟梅、奇异果家、仙茅蛋甶和鸡蛋淸溶菌酶的比对 <2)奂奈林、嗦吗甜和Bra/zrin的比对比较现有的甜蛋白（莫奈林、嗦吗甜和Brazzein)的三维结构，也儿乎没宥 发现它们之间存在任何的相似性。Brazzein、莫奈林和嗦吗甜三维结构的惟一共 同点是二级结构的一个小K域，即符合甜味指要求的办-折登发夹结构，这一结 构具有已在小分子甜味剂所确定的生甜团。
有别于其他C族G蛋A偶联受体的是，甜味受体为异型二聚体。一些研究 人员猜测，TIRs (特别是T1R3)很有可能就是甜味受体，并且可能像其他C族 G蛋白偶联受体一样形成同型二聚体。但是，几个月后，Li等便证明了只有异型 二聚体T1H2 -T1R3才具有甜味受体的功能。T1R3的序列有20%与mGluRs的 相同。在人们发现甜味受体的时期，mGluR8是惟一一种结构已被人们至少部分 了解了的C族G蛋白偶联受体。正是人们对mGluRlN端结构的了解，促成了首 个甜味受体同源模型的建立。类似于mGhiRl，这个模型为两条T1R3链的同型 二聚体。不久后，—个类似的模型表明，T1R3的活性位点可以容纳三个甜度极 高的小分子质量分子。
注：维持时间
(-)从甜菊叶子中提取甜菊双糖A苷在过去的10多年中，人们作了很大的努力企图从甜菊叶子中提取双糖A苷 进行商业化生产。已知提取T.艺中用来分离甜物质的是髙度极性溶剂——水，这 是因为甜菊苷仅微溶于水而双糖苷A在水中的溶解度很大。通过浓缩去掉水， 然后再用甲醇提取即可优化先分离出双糖苷A产品，但其中还含有部分甜菊苷。 去除甲醇后通过二氧化硅胶柱采用丙醉-水-乙基乙酸盐溶液作流动相进行色谱 分离，再在戊醇水溶液中通过重结晶方法即可得到纯净的甜菊双糖苷A。通过这 种方法，可从叶子中提取出0.25%的结晶双糖苷A。而不经色谱分离则可从干
