自流井区乳糖醇
用来提髙提取物产品风味的酶处理法，除了可通过酶重组法使甜菊苷转 变成味觉特性更好的甜菊双糖苷A外，通常还使用适当的转变剂将糖分子中 的葡萄糖单元转移至甜菊苷或其他甜菊苷类似物分子上。能提供葡萄糖基的 物质有芦_(1~>4)葡萄糖基、葡萄糖、冷-(1—3)葡萄糖基、环状糊 精、淀粉或部分水解物及同时有酵母存在的蔗糖、甘貉糖等。1980年有篇 美国专利描述了甜菊苷的酶处理方法，认为a-糖基甜菊苷的丨丨感特性优于 甜菊苷。
邻甲基苯胺法所用原料为邻甲基苯胺、亚硝酸钠、硫酸、铜粉、二氧化 硫、液氣、氨水、活性炭、液体氢氧化钠、盐酸、髙锰酸钾、亚硫酸钠和碳 酸氢钠等，主要化学反应有：觅氮、置换、氣化、胺化、氧化、酸析与中 和等。
(2)PK. 477bp； P^, 761 bp； P-. 880bp； 750bp。
利用从Af vinacea ATCC 20034中分离出的a -半乳糖苷酶，在上述三种有机 溶剂中将TCR水解为6-氣半乳糖和三氣蔗糖的反应过程，如图3-37所示。虽 然在甲基异丁基酮中，a-半乳糖苷酶水解TCR的反应速率达到了水相反应的 90% ,怛在每种溶剂中起始反应速率和最终产物浓度都比在水溶液中低。低反应 速率是由于在溶剂系统中，a-半乳糖苷酶有更高的A：?,而非一个更低的A：#。 因此在有机溶剂中，要获得和水相反应相似的反应速率，只能通过高底物浓度来 实现，但酶的活力因溶剂影响而快速降低。在所测试的溶剂中，酶的半衰期都不 超过3d。当TCR的水解度超过60%时，反应速率明显降低，因此要获得超过 80%的水解度就显得非常困难，必须使用很高的酶浓度并大大延长保温时间 (数天）。目前为止，还没有一种《-半乳糖苷酶能达到90%以上的水解度。
(六）以连三硫酸钠（Na2S306)和环己胺为原料
如图3 -2所示，三氣蔗糖在水中的溶解性很好，20T时的溶解度为 28.2%;但在脂肪中的溶解度很低，几乎不溶于玉米油中。在使用乳化剂的含油 或脂肪的多相物料系统中，三氣蔗糖将进人水相，这方面与蔗糖相似。
2.非均匀酶催化反应体系的产物分离
(5)限制件酶切位点缩写分别为：H, Hind丨；B. Bamll I ； S, Sal I ; X, Xba I ; N, Nco |。
Kondo等人曾尝试构建一 SCM质粒并在C— idilis中生产SCM。他们把 SCM基因插入由产脘假丝酵母(C. utUis)克隆来的GAP基因的启动子和终止子 片段之间。通过这种方式，他们获得了高产虽的SCM，表达水平高于总可溶性 蛋白的50%。他们还尝试克降带S. cerevisiae GAPDH启动子的SCM基因用来生 产SCM。然而，所得的产最水平很低，仅为总可溶性蛋白的5%左右。美国一专 利公开了利用P. pastoris生产SCM的方法。首先将合成的SCM基因克隆于含有 S. cerevisiae a -因子分泌信号和GAPDH启动子的PGAPZa -载体，然后将构建的 质粒转化成P.P^tori5GS115，最后通过菌株对Zcocin的阻抗性，对转化株进行 筛选。观察发现所分泌的.1：组英奈林为一条12kji的带。SDS - PAGE分析表明， 通过该方法可获得约10g/L的SCM。这些SCM经纯化后可引起甜味。
五、嗦吗甜的生产技术
