松溪县爱德万甜

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松溪县爱德万甜

松溪县爱德万甜
五、Neoculiii的基因表达
两非的当地居民早在几百年前就知道Brazzein这种物质了,人们要么生吃要 么煮来吃,也有人把它用作饮料或食品的甜味剂。
②持续时间的测定采用10jtmol/L仙茅进白和奇异果素。
图3 -51 X -衍射和SIMPLE的NMR分析得知的2 - 0H -0 -31氢键和协同产生的氢键
在曰本,人们将嗦吗甜添加于冰淇淋及冰冻乳制品(包料冰棍)中。当添加 人同时具有咖啡风味的乳制品中时,嗦吗甜能使产品的咖啡风味和牛奶香味都得以 增强。需经喷雾十燥的乳制品,干燥前添加些嗦吗甜,有助于消除产品的腥味。
(3)氨基磺酸-三氧化硫法:由氨基磺酸(或其鈦)与双乙烯酮加成制得 中间体,再经三氧化硫闭环,最后用氢氧化钾中和而获得产品。
热水似乎焙用于提取的较好介质,特别是味觉特性较好的甜菊双糖苷A在 热水中的溶解度要比甜菊莳大。然而,也有几篇专利描述了溶剂提取法的优越 性,这些溶剂包括乙醇、中醇、氣仿、甘油、山梨糖醇或丙二醇等。有时也用氢 化水解淀粉液作为提取溶剂。
以上四种合成方法中,方法(丨)和(2)均存在原料来源闲难,反应条件 苛刻等缺点,不利于工业化生产。方法(丨)和(4)所窬原料含氟化物,腐蚀 性强,且环境污染严重。方法(3)以工业上易得的氨基磺酸、双乙烯酮、三乙 胺、三氧化硫为原料,反应条件温和,产品收率高、纯度高,是一种较理想的工 业化生产方法,以下是对该法的详细介绍。
C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶(GAP)基 因,其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 GAP基㈥克隆至6.5kh £co/U片段。起始密码子上游的Ikb片段(-976? -1,推断+丨为翻译起始位点)作为启动子,用引物在V端加上N?d位点, 在3'端加上Xbal和BamHI位点。终止密码子下游0.7kb片段(+ 1006? + 1728)作为终止子,用引物在V端加上BamHI位点,在V端加上Pst丨位点, 将两片段在pBluescript SK的No丨丨和Pst丨位点间连接,构建得质粒pGAPPTIO (图5 - 15)。含单链莫奈林的0RF的0. 3kb的Dral - Bgl D片段插至pGAPPTIO 的平头Xbal位点和BamHI位点之间构建得PGAPM3。含rDNA片段的表达质 粒如下构建:从pCLRE2 (图5-14)中分离得到的含部分rDNA的1.2kb Apal 片段插至pBluescript SK的Apal位点构建得质粒pCRAl。在pCRAl的Xhol切 割平头端连接上Sphl连接体构建得pCRA2,在pCRAl的Asp7丨8切割平头端 连接上Notl连接体构建得pCRA3。pCRA3的1.2kh rDNA切割为0.5kb和 0. 7kh Notl - Bgl n片段后连接到质粒pUCBgl的Bgl n位点,构建得质粒 pCRA10o其中质粒pUCBgl由pUC19经EcoRI和HindHI酶切,并在Klenow酶 切处理后在切点处连接Bgl D连接体构建得到。质粒pCRA2经Sphl和EcoRI 酶切后,与由PCLRE16分离得到的含CYH抗性基因的1. Ikl, Sphl - KcoRI片 段连接构述得pCLR216。质粒pCRAlO经Xhol和Ps丨I酶切后,与含CYH抗性 基因的丨.1比?311-5&丨1片段(-184?+974)连接,构建得到pCRALll。从 PGAPM3分离得到的含莫奈林表达盒的2. Okb Notl - PstI片段插至pCLR216的 Notl和PstI位点构逑的质粒PCLRM216 (图5 - 16),插至pCRALl 1的Not丨和 PstI位点间构建得到质粒pKMll (图5-16)。C. W/is的URA3基因经与 的ura3突变子减基互补克隆得到,用作整合目标。URA3的801bP ORF 的 区域(+4?+356)和 3'区域(+356 ~+685)分別为 SaH-Bgin 和Bgl丨丨-AsP718片段,这两个片段插至pUC19的Sail和AsP718构建得质粒 pURAl0在pURAl的Hindffl酶切端和Asp718酶切平头端加上Not丨连接体分 别构建得到pURA2和PURA3。从pURA2的5,端分离得Noll - Bgl H片段,从 PURA3的1端分离得BglD - Notl片段,两片段连接至质粒pUCBg丨的Bgin位 点构建pURAlO。含CYH抗性基因的1. lkb PstI - Sail片段插至pURAlO的Sail 和PstI位点间,构建得pURALl 1。含莫奈林表达盒得2. Okb的Notl - PstI片段 插至pURALll的1^11和?8|丨位点间构建质粒pUMll (图5-16)。
通过将SCM基因克隆于带GADPH后动子和终止子的表达载体pGAP,然后 将其转化成S. DC04和DBY746,可生产出重组SCM及其突变体。利用

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