德格县甜菊糖
果素。首先，导入重组奇异果素基因，构建重组奇异果素的表达质粒，并在表达 质粒中插人KEX2切割位点；然后，将表达质粒导人如orrzoe，获得30 个产重组奇异果素的转化株。选择产量最高的菌株进行大规模培养，培养时间为 3d。Western印迹分析确定了培养基表面有重组奇异果岽的存在。结果还显示， 在非还原条件下，60ku处有一条宽带，301O1处仅有一条校糊的带；而在还原条 件下，60ku处的带消失，30ku处的带却变宽。这些结果与两个30ku单体在非还 原条件下形成60ku的二聚体的事实相符。重组奇异果素的产量估计为2mg/L培 养基，纯化重组奇异果素的产S娃0.8mg/L培养基，所得的单体重组奇异果素 和二聚体重组奇异果素的分子要比天然奇异果素的大。对N42、186Q突变体的 N端糖基化位点的分析结果清楚地表明，这是由于所得糖蛋白的糖链部分质里有 所不同而造成的。
阿力甜（Alitame)是由L-天冬氨酰、D -丙氨酸和C -端酰胺3部分组成， 它是用酰胺键替代阿斯巴甜分子中不稳定的酯键，使得化学稳定性得以显著提 高。用阿力甜增甜的部分酸性饮料，经长时间f*：存后会出现一些不配伍现象，感 官分析发现有明显的硫味。液体产品中可与阿力甜反应产生异味的物质，多数是 H202或NaHSO;等。截止2008年，阿力甜尚未被美国FDA认可，全世界只有中 国、澳大利亚和墨西哥等少数几个国家批准使用。1996年，JECFA确定的阿力 甜AD丨值为1 mg/kg。
通过转基因莴苣和番茄均可生产莫奈林，但两者植物所使用的启动子并不相 同。在转基因番茄表达使用的是E8启动子，这种后动子是可定向使莫奈林基因 在番茄中表达的水果专用启动子。而在转基因莴苣中表达则使用CaMV启动子， 这种启动子在许多植物器官中都具有活性。把含有莫奈林带E8启动子或CaMV 启动子的基㈥引入中即可。蛋白质从西红柿果皮或莴苣叶中提取。 对提取的蛋白质做western印迹分析和EL1SA,结果表明，在带有E8启动子和莫 奈林基因的转基因西红柿果实和带有CaMV启动子和莫奈林基W的转基因莴苣叶 中均可检测到重组莫奈林。用乙烯处理转基因两红柿，可使西红柿果皮中莫奈林 的产谊提高至23.9?^丨鲜重，诚著高于未经乙烯处理的转基因番茄。
3.固定化酶反应
四、三卤代苯甲酰胺
1998年12月，关于批准纽甜作为食品甜味剂的申请向美国食品与药物管理 局（FDA)提交，并于2002年得到美国FDA批准，随后中国等世界很多国家也 已经批准使用。纽甜代表着当今强力甜味剂研究的最高成就，前景广阔。
三、三氣蔗糖的生产技术
目前已有多种含巯基试剂如氧化型谷胱甘肽和胱氨酸用于蛋白质折黉复性， 其中采用胱氨酸比用氧化型谷胱甘肽成本低。将含巯基化合物胱氨酸合成蛋白 质-巯基半胱胺化合物阻隔游离的蛋白质巯基，这样可以有两个好处：变性蛋A 的水溶性敁著提高；只有加人弱还原剂后巯基才能进行相互交换。用还原型胱胺 化合物从变性蛋白质生产天然嗦吗甜的折叠过程如图5-5所示，最终得率提高 至约5pg/mL (25%),可以用品尝试验测定。酵母嗦吗甜A、B折垒复性的得率 较低，酵母嗦吗甜I不能折奋成天然（甜味）构型。酵母嗦吗甜的N端氨基酸 (一内氨酸）虽被乙酰基阻隔，但经-?系列试验证明这种修饰对蛋白质折替及甜味 没有影响。这些结果表明：嗦吗甜丨和A的另一个不同的氨基酸即第113位的 氨基酸可能不是天冬酰胺而是天（门）冬氨酸。
