东方市纽甜
б, 4\ \\ 6"-四氣棉籽糖，再经a-半乳糖苷酶水解去除Gal-6-C1即得
在发酵过程中，一旦葡萄糖从介质中抽走，G-6-a的含量迅速降低。而适 当提髙葡萄糖介质的浓度，可以缩短G-6-a达到最大浓度的发酵时间。当葡 萄糖的起始浓度为4%时，G-6-a的最大得率（丨.5%)可以在3(VC保温96~ 120h后得到；如果葡萄糖的浓度高于4%，摇瓶培养中的菌株生长和G-6-a的 分泌能力均下降，而葡萄糖浓度介于1% ~4%时，G-6-a的得率变化不大, 怛低于1%时得率就会降低。
CGTase催化转糖苷反应中，葡糖基是很好的糖基受体，而半乳糖基则不是。 因此用半乳糖苷酶催化转糖苷反应，将半乳糖基连接至甜叶悬钩子苷的19-竣 基相连的葡糖基上，再用该产物作为CGTase催化的底物，这样就可以选择性地 在13 -0H相连的葡糖基上进行转糖苷反应。
酯化反应的条件取决于酯化试剂的特性，如与乙酸酐反应时受吡啶等杂环胺 的影响。试验表明，若酯化反应在催化剂催化、无水和极性非质子传递溶剂中进 行，可得到较高得率的蔗糖单酯化物。蔗糖和乙酸酐在弱碱性条件（如吡啶溶 液）下很容易反应，单酯化物的得率较高。但在含水的强碱性条件下，蔗糖和 乙酸酐反应更容易生成多酯化物。尽管蔗糖的酯化反应也可以在酸性环境中进 行，但酸性环境容易导致蔗糖的水解。
研究表明，S-6-a与Vilsmeier试剂在特定参数下可选择性地进行氣化反 应，获得相应的6-乙酰基三氣蔗糖（TGS-6-a)，而且得率很髙。有关资料 认为，1 mol S-6-a最好与21 ~45mol Vilsmeier试剂反应，S-6-a在溶剂中的 浓度以5% ~45%为好，温度丨15~125弋。从理论上分析，lmolS-6-a只需与 3mol Vilsmeier试剂反应，而且过量的酸性Vilsmeier试剂会给设备设计与反应条 件易控制性等带来严重闲难。进一步试验证明，当S-6-a: ViUmeier试剂= 1:13 (mol/mol), S-6-a浓度为10% (w/v)时，反应过程中产生大最黑色沉 淀，是由于S-6-a炭化造成的。故本研究选取Vilsmeier试剂：S-6-a =5 ~ 9 (mol/mol), S-6-a 10% - 20% (w/v),温度 llO-UOt,时间 2.5~4.5h 为研究范围。
三、三氣蔗糖的生产技术
第四章高效糖苷
通过研究发现核糖体L41蛋白中的第56位氨基酸决定了酵母对CYH的敏感 性或抗性。56位氨基酸为谷氨酰胺时该蛋白为抗性蛋白，56位氨基酸是脯氨酸 时为敏感型蛋由。这也在CYH抗性酵母Candida mallosa、Kluyveromyces lactis和 Schwanninomyces cerevisiae 的 L41 蛋白得到了证实。对于 CYH 敏感型 Saccharomy- ces cerevisiae^将其L41蛋白第56位氨基酸的密码子用谷氨酰胺的密码子替换后， 细胞就具冇了 CYH抗性。
四、Neoculin的甜味与变味机理
单基团保护法合成三氣蔗糖，首要步骤是将蔗糖活泼的C-6位羟基进行单 独保护，然后再通过选择性氣化取代C-4、T，位上的羟基，最后脱去C-6 位上的保护基团生成终产物三氣蔗糖。如图3-28所示，除了各个步骤间必要的 分离操作，幣个制备过程主要包括以下3个步骤3①利用适当的保护基团，在合适的反应条件下，对蔗糖分子中的C-6位羟 基进行单基团保护。②选用适当的氣化试剂，选择性地氯化蔗糖C-4、\\ 上的羟基。图3 - 28单基团保护法合成三氣蔗糖的主要少骤③脱去C -6位上的保炉基团使其恢复为自由羟基，得到三氣蔗糖。
