大理州水苏糖
将50gTRISPA (0. 039mol)溶解在lOOmL 二氣丨t丨烷中，加入25mL乙酸， 降温至(TC后加人10mL浓盐酸，0T冰水浴、磁力搅拌下反应2h。加人处理过 的树脂于反应物中搅拌lh，过滤除去树脂后真空浓缩。200mL甲醇加人上述浓 缩浆液中，待完全溶解后降温至0T，磁力搅拌下反应3h。过滤出27. lg三苯基 甲醉沉淀物，滤液用活性炭脱色后真空浓缩，用乙醚结晶，得到19.8!?白色针状 物质，为2，3，4, 3、4'-五乙酸蔗糖酯（4-PAS)，得率为92%。
4.对甜味分子空间结构要求的设想由于甜味感觉对底物的要求可以是小如CHC13分子，到大如多肽和大分子蛋 白质，因此可以认为，甜味化合物和甜味蛋白受体之间最初的相互作用，发生在 受体表面部分。对于那些与受体之间无疏水接触的甜味剂分子，由于这种表面吸 附之间的作用力相对较低，故其甜度也低，这也许就是糖和糖醉均不是很甜的原 因。对于那些与受体之间有一处或多处疏水键合的甜味剂分子，除了在AH、B 基闭上的两点接触外，更包含有空间上的疏水键合，这种更深层次的键合则很可 能发生在甜味蛋白受体中类似酶活性位点的“嵴”或“裂缝”中。
图6 - 9 80T时糖精钠的水解曲线
③甜度较高，一般都在蔗糖甜度的50倍以上。
图5 - 19 在非选择性培养箪培养50代后各转化体产物的SDS - PAGE图 注：箭头所指为单链莫奈林分子位
选用三苯中基化和乙酰基化反应，来完全保护蔗糖的8个羟基。具体操作方 法是，在500mL圆底烧瓶中，依次加人20g蔗糖粉（0.058mol)和80mL 二甲基 屮酰胺，磁力搅拌并升温至50?65T使蔗糖完全溶解，再加入24g/V-甲基吗啉 (0.236mol)。分3次在3h内加人56. 8g三苯基氣甲烷（0. 197mol)，恒温反应 3.0-4. 5h0
用溴化撖(CNBr)将B链蛋氨酸旁边的肽键切断，释放出八肽（Lys-Lys- Thr-Ile-Tyr-Glu-Asn-Glu),残余蛋白质分子的甜味彻底丧失。Frank等人 用同样的方法从A肽链C -端切断八肽碎链并分离开，但未报道对甜味的影响悄 况。有人通过甲基化法考察莫奈林分子中赖氨酸残基对甜味的影响，发现 20% ~40%的赖氨酸残基甲基化后尚不会引起甜味的完全丧失。但随者甲基化率 的提高，甜度会逐渐卜'降直至最终消失。
相对于蔗糖、葡萄糖等可发酵碳水化合物型甜味料来说，链球菌(Streptococcus 咖廳) 作用于甜菊苷所生成的酸较少，表4-4所示为这方面的部分研究 结果。
该表达系统以产朊假丝酵母(CandUla utihs)为莫奈林基因的宿主细胞，采 用的GAP启动子，对的核糖体蛋甶L41基W进行体外突变得到 的放线菌酮Uycloheximide, CYH)抗性基因作为标记基因，质粒构建后再线性 化，以多拷W整合至宿主染色体进行表达。
{二）甜菊苷的产品改良如果提取出来的甜菊苷产品风味不太理想，那很可能枭由于没有完全去除掉 甜味杂质，或者提取产品中的甜菊苷与甜菊双糖苷A的比例不合适。改良方法 有混合、酶1：组、化学改性或超声波处理等。
