白玉县木糖
莫奈林娃从D. cumminsii的浆果果肉中提取出的甜味蛋白一般用水法抽提， 抽提液经离心分离、超滤浓缩后用离子交换色谱法提纯楮制，再经超滤脱盐后冷 冻干燥。起初，1kg浆果只能获得100?150mg的莫奈林，现在的提取得率已提 髙至3~5g。大批量处理时，可使用分批吸附法。先将水抽提液与分散在 0.02nu,l/L醋酸铵缓冲液（PH5.0)的吸附剂CM - Sephadex C25淤浆混合，接 着用水反复冲洗淤浆达到纯化的目的，然后用0.02mol/L NaCl溶液将吸附在 Sephadex上的莫奈林洗脱下来，超滤浓缩后冷冻干燥。这样分离得到的莫奈林， 若在离子交換色谱柱上分别用NaCl浓度呈梯度上升的PH7. 6和PH8. 2缓冲液进 行洗脱，还可进一步分级成5种纯组分，依次称为莫奈林I ~V,其中最主要的 是莫奈林IV。
注：①glc =仗葡筠糖基，rha =吐味鼠李糖基c②Rubu?o?idc = ■W■叶患构子芬③甜jec苷即卫茅B苷。图4-丨甜菊醉苷体的化学结构
世界各地的实验室已在人体和各种动物（大鼠、小鼠、狗、猴子、兔子、 猪、鸡、豚鼠）身上对甜蜜素及其主要代谢产物环己胺的其他潜在毒理（包括 诱变性）进行了广泛的试验，结果表明没有任何数据可认为甜蜜素和环己胺在 人体正常摄取范围内有中毒危险。以各种口服形式对甜蜜素和环己胺进行了许多 有关基因毒性试验，表明甜蜜素和环己胺都没有诱变性，也没发现有癌变或有遗 传缺陷的胚和细胞。
人们很早就认识到一种味可与另一种味相互作用，如果是两种味同时刺激受 体时更是如此。对混合刺激物深入细致的研究表明，甜味能减弱苦味。反过来也 是这样，一个单一的刺激物对另一种刺激物的影响符合一个简单的对数比例关 系。但是，如果刺激物彼此暂时分开，则会出现“适应”现象，前面的甜味刺 激会使随后的苦味更苦，其总体效果视刺激物是否相同而定。如果具有物理持久 性的甜味刺激物分子首先出现在口水中时，按照给予刺激物溶液的体积不同，其 适应现象易受影响。但令人奇怪的是，文献报道的多数心物学味觉研究均忽视了 溶液体积这个因素。通常认为基本味的响应强度只与所提供溶液的浓度有关，而 持久性与浓度、体积均有关系。当摄取了简单甜分子（如葡萄糖）水溶液世达 250mL时，其在口水中的持续时间至少有30s。然而，这个持久性只不过与刺激 物的开始下降（initial decline)情况有关，它必须同味觉持久性这个概念区分开 来，味持久性与离子载体附近的刺激物分子浓度集中引起的持续现象冇关。对一 种特殊形式的甜味剂，若事先能够仔细分析其时间与强度这两个因子的话，那么 基本味的相互作用显然对加工工艺是有利的，只有分别定量测出这些因子，才会 找到味改性所需的有效分子。此外，必须把每个因素都肴成是影响甜味的整个化 学接受过程中的一个内在特性^
将 20g4-PAS (0.036mol)加人 100mL 含 2 ~ 10mL 乙酸（0.035 ~0. 175mol) 的甲基异丁基酮中，加热回流3?4h,部分浓缩。冷却此溶液到601，加庚烷冷 却结晶，经洗涤干燥得到固体产物，为2，3，6, 3\ r -五乙酸蔗糖醋 (6-PAS〉。
随后，许多卤化蔗糖衍生物被合成成功。r-氣蔗糖的甜度是蔗糖的20倍， 在二甲基甲酰胺中，用二甲氣基二苯硅烷处理，蔗糖c-r和c-2位首先被阻 碍，得到丨\ 2-二苯基亚甲硅基蔗糖衍生物，产量约为20%左右。.将剩余的6 个羟基团乙酰化后，用沸水乙酸把亚甲硅基断裂除去。在嘧啶中用三苯甲基氣化 物可对剩下的第一类羟基进行三苯甲基化作用，并且使剩余的第二类羟基乙酰 化，得到r-三苯甲基-蔗糖-7-醋酸盐。在冰醋酸中用溴化氢进行脱三苯甲 基作用，然后在嘧啶中用磺酰氣氯化，再在二甲基中酰胺中用氣化锂处理，最 后，在甲醇中用甲醇钠脱脂化得到r-氯庶糖。
图5 - 15 莫奈林表达盒构建
毒性试验中也出现了唯一与纽甜有关的可逆转的临床生化变化，在给兔、狗 做为期13周剂量为0.6g/(kg_d)和为期一年剂鱼为0.8g/(kg ? d)的试验时， 出现了特异的肝脏碱性磷酸酶升高（4~5倍于对照组）。其他肝功能试验（如天 冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、谷氨酰转移酶和总胆色素）都没有改变，也没 有肝、胆道、胃肠道或骨的组织病理学发现。动物的单一碱性磷酸酶活性可以在 没有任何病变的基础上升高，是一种生理的适应，尤其是当环境改变时，并不是 添加纽甜所特有的。有试验也显示出人在食用13周纽甜以后没有出现碱性磷酸 酶和其他肝功能试验的改变。这表明在给予数千倍于预测消耗剂量的纽甜，在 兔、狗身上所观察到的可逆转的种系特异的血浆碱性磷酸酶活性升髙现象，是一 种非特异性的生理反应而不是毒性作用。
