卫滨区水苏糖
在非选择性培养基上培养转化细胞，在起始培养时各转化体的莫奈林表
由于莫奈林的A链N端与B链C端非常靠近，因此研究人员利用基因工程 技术生产共价的连接单链莫奈林。单链贷奈林有两种类型：SCM和MNE1。SCM 是通过直接把B链C端的Ghi50连接到A链N端的Argl而得，它由94个氨基 酸残基组成。MNE丨则是通过Gly-Phe 二肽连接B链和A链而得，由96个氨基 酸残基组成。利用这些合成的基因，研究人员已经实现在不同的宿主细胞（大 肠杆菌、酵母等）中表达和生产奠奈林。
除此之外，R前国内外已发展的不少高效甜味剂，由于单位甜度成本大大低 于蔗糖，出于降低生产成本的需要，在现代食品T业中也有重要的地位。
别与山梨糖醇混合时其甜味特性甚佳，特 別适合于应用在无能蛍糖果和要求有填充 剂的食品上。
三、甜二肽的分子模型
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20世纪60年代以来，人们从热带植物果实中发现了多种高甜度的天然蛋内 质（表5-1)，它们是嗦吗甜（Thanmatin)、莫奈林（Monellin)、马槟榔 (Mabinlin)、Brazzein、Pentadin、Curculin 和奇异果素（Miracu丨in)。另一种糖蛋 白Miraculin本身并没有甜味，但可使酸味变成强烈的甜味。
后一种假设需要些条件，它至少要求甜味与苦味受体同时存在于一个细胞 内。对同时具有甜味和苦味的甲基a - D -吡喃甘錤糖的研究证实了这个观点。 如果分子确在受体上两端极化，那么用蔗糖浓溶液预饱和甜受体就能阻止另一种 方式的结合。如果分子同时分别分配给甜味、苦味受体细胞的话，则对它们各自 的结合方式不产生什么影响。当用蔗糖预饱和舌头时，具有苦味的甲基a-D- 甘露糖苻的苦味会减小些，而同样悄况对奎宁（纯苦分子）的苦味却不产生什 么影响。因此，同时具有苦味和甜味的甲基a吡喃付孫糖苷能同时结合甜 受体与苦受体，用蔗糖预饱和一种结合方式（如与甜受体结合）就会影响另一 种方式的结合（如与苦味受体结合>。从另一个方向来进行这方面的实验，如用 奎宁来预饱和会得到同样的结果（见图1-35)。因此，至少有些甜受体与苦受 体之间的距离极近，在0.3~0.4nra范围内。H前，一个分子具有不同的结合方 式这种观点是许多假说的主题。受体本身还是假说的实体，各种有关它们的本质 的理论是通过对有味分子底物的化学研究建立起来的。
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
其中，[ZAUPMk和[ZAPMU是非离子型Z - ASp、PheOMe和 Z-Asp-PheOMe浓度；是底物和产物间的平衡常数，其中末端、侧链竣基 及末端氨基都足非离子形态，且带离子型羧基侧链的Z - Asp和带非离子型C端 的Z-Asp含量都忽略不计。
