湘阴县甜蜜素
第二章高效甜味肽
二、甜蜜素的生产技术
(二}蔗糖3个伯羟基的去保护作用
该法的主要特点是产品收率高、 产品质量稳定且冇保证、污染能治理、 生产周期比甲苯法短等。生产过程中 还可以根据市场需要随吋调整生产工 艺，采用不用甲苯进行氣化反应或酸 析反应，可以得到固体邻甲酸甲酯苯 磺酰氣或不溶性糖楮，两者都可以用 作农药中间体。
20世纪60年代末，这种植物受到许多国家和地区的重视。日本、新加坡、 马来西亚、韩国、以色列及中国均有大量种植。日本6丨969年禁用甜密素以来， 对甜菊苷备加重视。但由于其人体毒理学和代谢资料尚不够完整，目前世界上仅 中国、日本、韩国、巴西、巴拉圭、泰国和马來西亚等少数几个国家批准使用， 甜菊苷的AD1值为5.5mg/kg。截止2008年，尚未得到欧美等国家的批准。在过 去20年内，美国FDA共3次拒绝批准它的食品添加剂地位。但是，1995年9月 18日，美国FDA却又批准它可以作为“膳食补充剂”（Dietary Supplemem)进 行销俦和消费。
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
②蔗糖C-2位上平伏的a-羟基是甜味所必需的，因为6，1、6,-三氣- 6，丨\ 6,-三脱氧蔗糖的甜度是蔗糖的100倍，而其C-2位上的羟基被氣取代 并经构型转化后生成的2，6,丨\ 6'-四氣-2，6，丨、6^-四脱氧甘露蔗糖却 像喹啉一样苦。
三、甜蜜素的安全毒理学分析
英国药物安全委员会在仔细审查了嗦吗甜作为医药品的一种陚形剂的安全性 与适用性后，于1981年10月批准使用。嗦吗甜特别能替代糖精应用于医药品， 它还能增强凉性药物的风味，它还有其他几种用途目前仍在临床试验中。
