克井镇AK糖
本法只需以葡萄糖和蔗糖为前体，但要通过发酵产生G-6-a，这是一个昂 贵的过程，因为它需要杀菌操作及分离除去G-6-a中的葡萄糖。此外，虽然 果糖转移酶反应可以在高底物浓度下进行并获得较髙得率的S - 6 - a，但分离提 纯S-6-a则是困难的，因为所有试图结晶出S-6-a的努力都不成功，它只能
至于MNEI，也已被合成且克降于带有T71ac启动子的pET -22b +的载体 中，并于大肠杆菌BL21 (DE3)中得到表达。最近，单链莫奈林基闪MNE丨已 在大肠杆菌偏爱密码子的基础上被设计出来，从而优化了基因在大肠杆菌中的表 达。这些合成莫奈林基因被克隆于含T7启动子的PET-22 b载体。SDS-PAGE 分析结果表明，重组莫奈林的产虽髙达总可溶性蛋白的45%。
图2 -37由单晶X -衍射法所推出的纽甜晶体中疏水取代基的U ■构象
时所感到的甜度要比此数值大或小。例如，与2%蔗糖溶液相比，它的甜度是40 倍，但与20%蔗糖溶液相比，其甜度只有24倍，这可能足由于髙浓度的甜蜜素 带来了苦后味的缘故。但这种苦后味只有在高浓度条件下才出现，通常使用范围 内不会感觉到。表6-2所示为在不同浓度下甜蜜素相对于蔗糖的甜度。总的说 来，甜蜜素的甜味特性甚佳。
果素。首先，导入重组奇异果素基因，构建重组奇异果素的表达质粒，并在表达 质粒中插人KEX2切割位点；然后，将表达质粒导人如orrzoe，获得30 个产重组奇异果素的转化株。选择产量最高的菌株进行大规模培养，培养时间为 3d。Western印迹分析确定了培养基表面有重组奇异果岽的存在。结果还显示， 在非还原条件下，60ku处有一条宽带，301O1处仅有一条校糊的带；而在还原条 件下，60ku处的带消失，30ku处的带却变宽。这些结果与两个30ku单体在非还 原条件下形成60ku的二聚体的事实相符。重组奇异果素的产量估计为2mg/L培 养基，纯化重组奇异果素的产S娃0.8mg/L培养基，所得的单体重组奇异果素 和二聚体重组奇异果素的分子要比天然奇异果素的大。对N42、186Q突变体的 N端糖基化位点的分析结果清楚地表明，这是由于所得糖蛋白的糖链部分质里有 所不同而造成的。
正如本章第一节所述，在阿斯巴甜的代谢过程中可释放出55%的苯丙氨酸。 苯丙氨酸是人体必需8种氨基酸中的1种，进人通常的代谢途径进行代谢，但是 患有苯丙酮酸尿症（PKU)的患者缺乏代谢苯丙氨酸的能力。如表2-29所示， 尽管与肉、奶及其他蛋白质食品相比，阿斯巴甜中的苯丙氨酸含量很低，但很多 国家都规定，含有阿斯巴甜的食品必须在包装上注明该产品含有苯丙氨酸，以提 醒PKU患者的注意。由于以纽甜增甜的食品中纽甜的浓度大约为阿斯巴甜的 1/40，因此这种产品中的苯丙氨酸含鱼极低，含17rng/L纽甜单水合物相当于含 7.08mg/L苯丙氨酸，大大低于果汁的苯丙氨酸含量。而且，17mg纽甜中的苯 丙氨酸通过代谢途径进人机体的有效数萤就更低了，不足0.7mg，为阿斯巴甜 释放量的1/400。因此，以纽甜增甜的食品没有必要注明其含有苯丙氨酸。
毒性试验中也出现了唯一与纽甜有关的可逆转的临床生化变化，在给兔、狗 做为期13周剂量为0.6g/(kg_d)和为期一年剂鱼为0.8g/(kg ? d)的试验时， 出现了特异的肝脏碱性磷酸酶升高（4~5倍于对照组）。其他肝功能试验（如天 冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、谷氨酰转移酶和总胆色素）都没有改变，也没 有肝、胆道、胃肠道或骨的组织病理学发现。动物的单一碱性磷酸酶活性可以在 没有任何病变的基础上升高，是一种生理的适应，尤其是当环境改变时，并不是 添加纽甜所特有的。有试验也显示出人在食用13周纽甜以后没有出现碱性磷酸 酶和其他肝功能试验的改变。这表明在给予数千倍于预测消耗剂量的纽甜，在 兔、狗身上所观察到的可逆转的种系特异的血浆碱性磷酸酶活性升髙现象，是一 种非特异性的生理反应而不是毒性作用。
在KOH作用下，氟磺乙酰乙酸胺分解出氟化物，可环化成二氢氧硫氮杂环 二氧化物，由于二氢氧硫氮杂环二氧化物酸性强，与KOH作用易生成盐类。当 然也可用NaOH或Ca (0H)2代替KOH生成相应的盐类产品。安赛蜜的幣个合 成途径见图6-25。
发酵生成的G - 6 - a必须在特定酶的作用下从蔗糖中转移果糖基单元，才 能最终生成S-6-a。已知蔗糖合成酶可以合成蔗糖，但它却不能合成S-6-a。 而蔗糖-6 -磷酸盐合成酶尽管可以合成蔗糖-6 -磷酸酯，但蔗糖磷酸酯化物由 于对氣化反应不稳定而不能作为C -6位羟基的保护基团，因此该酶也不适宜在 蔗糖的单基团保护中应用。葡糖基转移酶如环状糊楮葡糖基转移酶，因不能高效 地将中.糖基团转移到果糖上，而不能用来形成蔗糖和蔗糖酯化物。此外，菊粉酶 (Inulinase)也不能生成S-6-a。虽然将蔗糖6 -果糖基转移酶作用于蔗糖和 G-6-a可以获得低得率的S-6-a,但它却要求极大过量的蔗糖参与反应，且 易造成聚合产物和水解产物占优势地位，因此也不适宜用来合成S-6-a。
3-苄基-6-竣甲基-2，5-二氧代哌嗪，简称二酮基哌嗪（丨)KP)。纽甜 分解途径中无环化途径，这就解释了中性条件纽甜与阿斯巴甜相比稳定性显 著增加的原W。这使得纽甜可应用在阿斯巴甜不能直接应用的新领域，如焙 烤食品图2-40 纽甜水解成二甲基丁基天冬氨酰苯丙氨酸(DMB-Asp-PIie)和甲舴(MeOH)
