高州市D-木糖
表6 -5 安赛蜜在有机溶剂中的溶解度
由表3-5可得，最佳反应条件为：三苯甲基化反应在551下进行4. 5h,乙 酰化反应在115T下进行3h。在该条件下进行反应，TR丨SPA得率可达67. 94%。 另外，在三苯甲基化反应中必须严格保持反应体系的无水状态及干燥，以免三苯 基氣甲烷发生水解。
阁4 - 13所示为甜菊苷和挤压膨胀淀粉比为0.4：1.0,挤压膨胀淀粉浓度对 转葡糖基得率及环糊精浓度的影响。挤压膨胀淀粉浓度>75g/L,甜菊苷转葡糖 基得率基本保持恒定，>100g/L时得率显著下降。在挤压膨胀淀粉浓度<75g/L 时，环糊精随浓度增加而增加，但当淀粉浓度继续升高时，基本保持不变。
图5-11带L41诳内质基因的质粒的限制性酶切图 上方是由基因组DNA文库筛选得到的庾粒的艰制件《切ffl。细线条表示质粒pBR322的部分序列； 粗线条表示能与探针杂交的区域；序列位置和长度如箭头所示。
以核糖体蛋白质L41基因为标记，将用32P标记的含C. makosa的RIM - C基 因的Xbal -Sau3AI片段与Candida utUis ATCC9950的基因组DNA进行DNA杂交 分析，结果表明存在一个与KIM - C基因同源的基因。对Candida ut'dis ATCC9950的DNA用Sau3AI进行部分切割后的片段（5~10kb)转人经BamHI 酶切的质粒PBR322构建基因组DNA文库，用RIM - C基W探针对约30 000个 克隆子进行筛选，筛选得到5个正（positive)克隆子，对其中3个质粒构建了 限制性酶切谱图（图5-11)。该同源基W在质粒DNA上的大致位置通过对质粒 的限制性酶切片段进行DNA杂交分析得到。将能与探针杂交的4kb EcoRI片段 双向亚克隆至质粒pBluescript II SK进行DNA序列分析，现已测定广含L41基因 的2086hP的BamHI - SacI片段的DNA序列（图5 - 12),其排序策略如图5-11 所示。
经逐步稀释品尝试验测定植物嗦吗甜的甜味阈值为（2. 3 ±0.9) jig/mL,分 泌嗦吗甜及折登型嗦吗甜的甜味阈值均与植物嗦吗甜的相近。
也可以通过烟草表达莫奈林。首先合成了由噬菡体PI Cre重组酶介导的特异 ?组位点丨OXP的序列，构建了两个loxP同向重复的棺物表达栽体pGLX121. 1。 PCR定点突变了 CaMV 35S启动子元件中kozak序列，使kozak中的翻译起始密码 子ATG位于Ncol位点上。把spm基因克隆到表达载体pG〖MA的Ncol和PstI之 间，给甜蛋白8pm基因加上35S启动子和polyA及NOS终止子元件，然后克隆到 PGLX121. 1的EcoRI位点上，用农杆菌LBA4404转化烟草，获得卡那痗素抗性转 基因植株，经过PCR及southern分析，证明甜蛋白spm基因已整合到烟荩基因组 内。用转基因烟草的总RNA通过RT-PCR反转录扩增spm基因，证明了在35S启 动子及其他调控元件的控制下，spm基因在转基W烟草中转录表达出mRNA。提取 转基因烟草总蛋白，经SDS-PAGE分析，初步证明了 8pm基因在转基因烟草中表 达出目的甜蛋白。
阿斯巴甜的酶法合成流程
急性毒理试验是以同时包含甜菊苷和甜菊双糖苷A的提取物为原料的。含有 50%甜菊背和40%甜菊双糖苷的甜菊提取物对大鼠的f?数致死虽LD?为3.4g/kg, 对小鼠的半数致死量为17 ~42g/kg。Med?n认为用双糖A、B、C苷，甜菊醇生糖 苷和卫矛A苷口服喂养小鼠均无毒。Alcashi等人用含双糖A苷和甜菊苷的甜叶菊 水提取液喂养小鼠3个月进行亚急性毒理试验，也没有发现任何有害作用。
