安陆市纽甜
果素。首先，导入重组奇异果素基因，构建重组奇异果素的表达质粒，并在表达 质粒中插人KEX2切割位点；然后，将表达质粒导人如orrzoe，获得30 个产重组奇异果素的转化株。选择产量最高的菌株进行大规模培养，培养时间为 3d。Western印迹分析确定了培养基表面有重组奇异果岽的存在。结果还显示， 在非还原条件下，60ku处有一条宽带，301O1处仅有一条校糊的带；而在还原条 件下，60ku处的带消失，30ku处的带却变宽。这些结果与两个30ku单体在非还 原条件下形成60ku的二聚体的事实相符。重组奇异果素的产量估计为2mg/L培 养基，纯化重组奇异果素的产S娃0.8mg/L培养基，所得的单体重组奇异果素 和二聚体重组奇异果素的分子要比天然奇异果素的大。对N42、186Q突变体的 N端糖基化位点的分析结果清楚地表明，这是由于所得糖蛋白的糖链部分质里有 所不同而造成的。
图4-38 PhyUodulcin (1)及具非甜味同沏物Hydrangcnol (2)的化学结构图
日本Iwanuira共研究了 217种二肽同型物，将其分成四个结构组。与Heijden 一样，他在多次回归分析时也考虑到立体空间的疏水性方面的参数，但另外补充 一个电子参数。对于所有二肽化合物，电子和空间参数两个都很重要，而疏水性 参数则未必如此。电子参数对L-天冬氨酰-氨基乙酸酯最为重要，该分子包括 了表2 -50所列的强力甜味剂L -天冬氨酰-氨基丙二酸二酯。通过对化合物进 行回归，可得出如下方程式：
(二）非均匀反应体系
对Brazzein分子中的半胱氨酸、赖氨酸、酪氨酸、组氨酸和精氨酸的化学修 饰均导致甜味的降低或丧失。Brazzein的半胱氨酸具有极为重要的结构意义，它 们的还原和S烷基化将导致Brazzein 二级结构的解体和三级结构的破坏，从而使 甜味活性丧失。仔细分析除半胱氨酸外化学修饰硓示的其他重要活性相关残基, 可以推测分子中的2个区域可能是其活性中心的组成部分：一个区域以a螺旋和 卢折叠的链DI之间的转角为中心，包括分子中唯一的组氨酸HiS31以及残基 Arg33、Lys27和Lys30;另外一个区域以冷折香的链II和链DI之间的转角为中 心，包括残基Tyr39、Lys42和Arg43。在Brazzein的三维结构中，含Arg33的区 域接近残基Tyr54和Tyt51，因此，它与C端有着密切的关系。总的说来，这些 数据表明，C端是Brazzein甜味产生的必要因素。
图3-19 4-PAS浓度对 6-PAS得率的影响
据报道，甘草甜素在治疗得溃疡上有潜在的作用。在1个临床试验中，让病 人每次摄人1片含甘草甜素的药片，每天3次，持续4周。这种药片每500g含. 有甘草甜素380mg、碱式硝酸铋lOOmg、干燥的氧化铝凝胶100mg、碳酸镁 200mg,碳酸氢钠100mg和泻鼠李皮30mg。以服用含焦糖色乳糖空白对照剂的 病人为控制组，治疗效果以摄入药片后溃疡面积的大小为标准来衡量。结果表 明，摄入甘草的病人中有44%的溃疡面消失，而控制组的为6%。在接受治疗的 病人中，溃疡平均面积减少的占78%，而控制组的为34%。另外的研究结果与 此类似，有92%的病人的溃疡面积减小，而以乳糖为对照剂的控制组仅有39% 的比例。
美国一般根据一项14d的关于阿斯巴甜的消费量的详细调查资料，以及在饮 料中纽甜和阿斯巴甜甜度的比较（保守估计为31倍），来确定纽甜的使用量。 饮料是阿斯巴甜和纽甜所期望的主要使用范畴，而更为安全的一种预测纽甜消费 量的设想是用它来取代膳食中所有的阿斯巴甜。基于这些假设，美国食品与药物 管理局估计所有消费者中，预测纽甜的平均和90%的每日消耗最分别是0. 04和 0. 10mg/kg体重。因各国膳食模式的不同，在澳大利亚和新西兰，纽甜的预测每 日平均消耗萤分别是0. 02和0. 01 mg/kg体重，分别焙可接受每日摄入量的1% 和0.5%，纽甜的95%预测摄入萤分别为0.112和0.05111&^8体觅，相当于可接 受的每日摄人量的5. 6%和2. 5%。
然而，鉴于两代白鼠试验发现了明显的膀胱癌变，似乎没有一个国家认为可 以无限里地使用，丹麦、荷兰等国家仍严格限制它的使用，世界食品添加剂联合 专家委员会也将原先同意的糖精AW值0?5mg/kg减少到0. 0-2. 5mg/kg,并取 消了有条件的0~15mg/kg。
1975年，日本明石和光桥两人分别报道了他们用大鼠和小鼠进行的详细研 究结果。明石分别测定了甜叶菊粗提取物（含甜菊苷20% >、纯提取物（含甜菊 苷40%?55%)和甜菊苷结晶体（含甜菊苷93% -95% )三种样品的半数致死 萤，大鼠经口服分析结果分别是17g/kg、42^/kg和15g/kg。明石认为，结晶制 品的溶解度低，在宵中产生凝聚现象导致动物死亡。光桥用Wistar雄小鼠经皮下 注射试验测得的半数致死量为1.59g/kg，用ICR族大鼠经口摄入及皮下注 射测得数值均在8. 2g/kg以上。光桥使用的是甜菊苷粉末状样品。
